Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白，CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中，例如亨廷顿综合症，caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性，其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使用(Ac-IETD)2- ProRed 作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割 ProRed 肽产生强蓝色荧光（eX/eM = 530/620 NM）。这种特性使得试剂盒能适合于DAPI滤光器。本试剂盒提供所有必需组分和佳操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。，为您提供优质的Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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荧光酶标仪
Ex:	450 nm
Em：	620 nm
Cutoff：	610 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	顶/底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温下孵育1小时
4.在Ex / Em = 535/620 nm（截止= 610 nm）监测荧光强度（顶部或底部读取模式）

 

储存溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Ac-IETD-ProRed 原液（200X）：
将65μLDMSO加入到Ac-IETD-ProRed （组分A）的小瓶中并充分混合以制备200X Ac-IETD-ProRed 储备溶液。避光。

 

工作溶液配制

将50μL的200X Ac-IETD-ProRed 储备溶液加入10mL的分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspase 8工作液不稳定，请及时使用。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞3-4小时）以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 8工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂，以确认对caspase 8样活性的抑制作用。

5.在Ex / Em = 535 / 620nm（截止= 610nm）下用荧光酶标仪（顶部或底部读取模式）监测荧光强度。注意：有时，如果使用底部读取模式，底部读数可提供更好的信号与背景比，离心细胞板（特别是非粘附细胞）在800 rpm下2分钟。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 8活性 红色荧光 。 在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的以200,000个细胞/90μL/孔接种Jurkat细胞。 用或不用1μM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶8工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540 / 620nm（截止值= 610nm）下测量荧光强度。

 

参考文献

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