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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Microplate Reader*
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
500tests
| Ex (nm) | 613 | Em (nm) | 631 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的消失来检测细胞凋亡。 MMP的凋亡与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发了细胞凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter 线粒体膜电位测定试剂盒可通过优化的测定方法提供所有基本成分。荧光测定法使用我们专有的阳离子MitoTell Red检测MMP消失的细胞凋亡。在正常细胞中，当MitoTell Red堆积在线粒体中时，红色荧光强度会增加。但是，在凋亡细胞中，MMP凋亡后，MitoTell Red的荧光强度降低。 MitoTell Red染色的细胞可以通过荧光显微镜Cy5通道或荧光酶标仪读取。该试剂盒经过优化，可通过荧光酶标仪读取凋亡和抑制剂。而且该测定可以以方便的96孔和384孔荧光酶标仪进行检测，而无需清洗步骤。，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。
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荧光酶标仪 |
|
| Ex: | 610 nm |
| Em： | 650 nm |
| Cutoff： | 630 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式： | 底读模式 |
样品实验方案
简要概述
- 准备细胞
- 添加测试化合物
- 添加MitoTell Red工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
- 将板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育30分钟
- 添加测定缓冲液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）
- 在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm）或使用Cy5滤光片的荧光显微镜下检测荧光增加（底部读取模式）
溶液配制
将50 µL的200X MitoTell Red（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液A（组分B）中，并充分混合以制成MitoTell Red工作溶液，避光。
实验步骤
1.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。注意：我们用20 µM CCCP处理HeLa细胞15分钟，以改变线粒体膜电位。CCCP或FCCP可以与MitoTell Red同时添加。为了获得结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。
2.将100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Red工作溶液加入细胞板。
3.在避光的条件下，将板在37ºC下孵育15-30分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
4.将50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的测定缓冲液B（组分C）添加到细胞板中。注意：加载后请勿洗涤细胞。对于非贴壁细胞，建议在加入测定缓冲液B（组分C）后，以800 rpm离心细胞板2分钟，然后制动。
5.加入测定缓冲液B（组分C）后10到30分钟，用荧光酶标仪（Ext / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm））检测荧光强度，或在荧光下用带Cy5滤镜的显微镜观察荧光信号。
参考文献
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Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663
Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
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Authors: Guthrie HD, Welch GR.
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Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129
Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
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The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
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Journal: J Cell Sci (2008): 75
Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003
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文献和实验信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase的级联反应。 由于 GSH与氧化还原作用及线粒体 功能密切相关，此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外，还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如：HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化，不能用此法检测。
性的改变。MitoSensorTM，一个阳离子性的染色剂，对此改变非常敏感，呈现出不同的荧光染色。正常细胞中，它在线粒体中形成聚集体，发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中，因线粒体穿膜电位的改变，它以单体形式存在于细胞液中，发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是，这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。二
标记法、PI单染色法流式细胞仪检测等。 三、样品来源不同选择 组织：主要用形态学方法(HE染色，透射电镜、石蜡包埋组织切片进行原位末端标记，ELISA或将组织碾碎消化做琼脂糖凝胶电泳)。 培养的细胞：几乎所有方法 1、早期检测: （1）PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 （2）细胞内氧化还原状态改变的检测 （3）细胞色素C的定位检测 （4） 线粒体膜电位变化的检测 2、晚期检测： 细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp
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