PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒* Bri

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光*是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量生成，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供了一种快速，简单且均一的发光检测方法，用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 该测定可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行。 此测定法的高灵敏度允许在许多生物系统，环境样品和食品中检测ATP。 该PhosphoWorks ATP分析试剂盒每孔可检测低至10个细胞。 它具有稳定的发光，无需混合或分离，并且配方具有小的动手时间。，为您提供优质的PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒 *明亮发光*。 

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）制备细胞（样品）
2.加入等体积的ATP工作溶液（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监控发光强度

 

溶液配制

工作溶液配制

1.将全部反应缓冲液（组分C，10 mL）转移到ATP传感器（组分B）中，并充分混合。

2.将20 µL ATP监测酶（组分A）添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成ATP工作溶液。 注意：避免来自外源性生物来源的潜在ATP污染。

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样品操作

1.运行ATP分析：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL的10X化合物（用于96孔板）或5 µL的5X化合物（用于384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育所需的时间，例如24、48或96小时。

1.3向每个孔中添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5使用标准发光计监控发光强度。

2.生成标准ATP校准曲线：

如果需要计算样品中ATP的绝对量，则应与上述测定法一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）来测量背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中稀释一系列ATP。注意：通常，ATP浓度从1 nM到10 µM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液添加到一个空板中（对于96孔板是100 µL，对于384孔板是25 µL）。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5使用标准发光计监控发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

 

参考文献

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