Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与细胞内的相关的活性氧（ROS）的异常产生和DNA损伤。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。，为您提供优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒。 

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实验示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC孵育30-60分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 540/590 nm（截止波长= 570 nm）或使用TRITC滤光片的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

 

操作步骤

1.刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞）。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在无血清培养基或您选择的缓冲液中。或者，可以在常规的全培养基中制备和处理细胞。 与JZL1707 NAD（P）H传感器一起孵育时，更换为您选择的无血清培养基或缓冲液。

2.在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液。 将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC共孵育30-60分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃下共孵育30分钟。 详细信息请参见图1。

3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。 移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

4.使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy3过滤器或TRITC过滤器组拍摄图像。

 

参考文献

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Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光	Cat#15295