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- AAT Bioquest
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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Screen Quest™ Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence*
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
1plate
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
膜电位是细胞内外的电压差。膜电位使细胞发挥电池的作用，为各种嵌入膜内的“分子器件”提供动力。在神经元等电兴奋性细胞中，膜电位被用来在细胞的不同部位传递信号。在膜的某一点上打开或关闭离子通道会使膜电位发生局部变化，从而使电流迅速流向膜的其他点。离子通道已被确定为重要的药物发现靶点。我们的Screen Quest 膜电位检测试剂盒是一种具有快速读取的均相检测方法。它使用我们专有的长波长膜电位指示剂检测由离子通道的打开和关闭引起的膜电位变化。试剂盒中使用的膜电位指示剂的红色荧光增强了进入细胞的荧光，并将筛选化合物和细胞自身荧光造成的干扰降至低。，为您提供优质的Screen Quest 膜电位检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 530 nm |
| Em： | 570 nm |
| Cutoff： | 550 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取/分液处理 |
| 其他可用仪器 | |
| FDSS、FLIPR、FlexStation、NOVOStar |
样品实验方案
简要概述
- 在生长培养基中准备细胞
- 添加MP染料工作液
- 在室温下孵育30至60分钟
- 检测添加膜电位后化合物的荧光变化
溶液配制
储备溶液配制
1.分析缓冲液原液（1X）：将1 mL的10X分析缓冲液（组分B）添加到9 mL的HHBS中（组分C，不包括#36001），并充分混合。 注意：10 mL的1X分析缓冲液足以用于1个板。
工作溶液配制
将15 uL的MP Sensor（组分A）添加到10 mL的1X 分析缓冲液储备溶液中并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少两个小时。
实验步骤
1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）MP染料工作溶液添加到细胞板中。注意：如果您的筛选化合物干扰了生长培养基和血清因子，那么在添加MP染料工作溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。注意：上色后请勿清洗细胞。
2.在细胞培养箱中孵育工作溶液板30分钟。注意：在某些情况下，在室温下孵育30至60分钟可能会更好。
3.通过使用HHBS或所需的缓冲液来准备复合板。
4.在加入化合物的前后，使用荧光酶标仪中的内置液体处理器，通过检测Ex / Em = 530/570 nm处的荧光来运行膜电势测定。注意：在实验之前进行信号测试非常重要，不同的仪器具有各自的强度范围。将信号测试强度调整为大仪器强度计数的10％到15％。例如，FLIPR-384的大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置，使其信号测试强度约为7,000至10,000。
图示
 图1.用P2X受体瞬时转染的HEK细胞中的ATP剂量反应。 用P2X受体瞬时转染的HEK细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔的速度在Costar黑墙/透明底部96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL MP染料上载溶液在5％CO2、37°C的培养箱中孵育60分钟。 FlexStation添加了ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。 用底部读取模式在Ex / Em = 530/570 nm（在550 nm处截止）下测量荧光信号。 |
参考文献
A novel high-throughput screening assay for HCN channel blocker using membrane potential-sensitive dye and FLIPR
Authors: Vasilyev DV, Shan QJ, Lee YT, Soloveva V, Nawoschik SP, Kaftan EJ, Dunlop J, Mayer SC, Bowlby MR.
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A high-capacity membrane potential FRET-based assay for the sodium-coupled glucose co-transporter SGLT1
Authors: Weinglass AB, Swensen AM, Liu J, Schmalhofer W, Thomas A, Williams B, Ross L, Hashizume K, Kohler M, Kaczorowski GJ, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 255
Miniaturization and HTS of a FRET-based membrane potential assay for K(ir) channel inhibitors
Authors: Solly K, Cassaday J, Felix JP, Garcia ML, Ferrer M, Strulovici B, Kiss L.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 225
A quantitative evaluation of peroxidase inhibitors for tyramide signal amplification mediated cytochemistry and histochemistry
Authors: Liu G, Amin S, Okuhama NN, Liao G, Mingle LA.
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Validation of a fluorescent imaging plate reader membrane potential assay for high-throughput screening of glycine transporter modulators
Authors: Benjamin ER, Skelton J, Hanway D, Olanrewaju S, Pruthi F, Ilyin VI, Lavery D, Victory SF, Valenzano KJ.
Journal: J Biomol Screen (2005): 365
Functional assay of voltage-gated sodium channels using membrane potential-sensitive dyes
Authors: Felix JP, Williams BS, Priest BT, Brochu RM, Dick IE, Warren VA, Yan L, Slaughter RS, Kaczorowski GJ, Smith MM, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2004): 260
Functional characterisation of the human alpha1 glycine receptor in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Kristiansen U.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 1789
Pharmacological characterization of human excitatory amino acid transporters EAAT1, EAAT2 and EAAT3 in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Brauner-Osborne H.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 2115
A rapid assay for the brevetoxin group of sodium channel activators based on fluorescence monitoring of synaptoneurosomal membrane potential
Authors: David LS, Plakas SM, El Said KR, Jester EL, Dickey RW, Nicholson RA.
Journal: Toxicon (2003): 191
Membrane potential fluorescence: a rapid and highly sensitive assay for nicotinic receptor channel function
Authors: Fitch RW, Xiao Y, Kellar KJ, Daly JW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2003): 4909
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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Cell-Light TM EdU荧光显微镜检测试剂盒说明书
锐博生物新的EdU荧光标记技术，能够方便、快速、准确的检测研究细胞的增殖、周期、凋亡、活性、分化、迁移及示踪。 详细使用说明请见下面的PDF文档！ C10310&C10312 Cell-Light TM EdU荧光显微镜检测试剂盒说明书.pdf 需要订购相关产品请填好下面的合同和信息卡发到：sales-cd@ribobio.com ！ EdU&EU 订购信息卡.xls Ribobio 2010年购销合同.doc
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