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文献和实验3'从1085位开始,5‘端加的EcoL1酶切位点,保护碱基为ccg 这两天准备送出去,突然发现一些小问题 首先,我的反义引物中为了避免二聚体的形成,修改了一个碱基,将T改为拉A,不知道是否有影响 另外反义引物与另外一条模板(就是不是反义引物结合的这条链)1129位前面11个碱基有错配,反义引物本身位于1085。不知道是否会影响产物的生成 此外,一般计算Tm和引物长度时是不是不用将酶切位点算在内。我觉得我的引物似乎有点长,不知道有无影响! 正义引物(不考虑酶切位点)长19bp,Tm59.56
ELECTROPORATION OF ES CELLS AND ISOLATION OF H/R CLONES
) + 0.73 ml PBS To A add 15 ug linearised plasmid DNA, IMMEDIATELY prior to electroporation. B no DNA 3. Using a Biorad Gene Pulser, (McMahon, A.P., and Bradley, A. (1990) Cell 62 1073-1085). "Zap" each curvette twice i.e. 500 uF 230V then 500 uF 240
ELECTROPORATION OF ES CELLS AND ISOLATION OF H/R CLONES
(2 x 106 cells ) + 0.73 ml PBS To A add 15 ug linearised plasmid DNA, IMMEDIATELY prior to electroporation.. B no DNA 3. Using a Biorad Gene Pulser, (McMahon, A.P., and Bradley, A. (1990) Cell 62 1073-1085). "Zap" each curvette twice i.e
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