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文献和实验Elabscience | BV2细胞M1极化造模与流式检测,这份Protocol请收好
转染、RNA干扰和CRISPR编辑等遗传操作,为信号通路机制研究提供了便利。 2. 对LPS等刺激反应灵敏,可诱导明确的M1/M2极化:BV2细胞表面高表达TLR4受体,LPS刺激后通过MyD88依赖途径激活NF-κB和MAPK信号通路,诱导经典M1型极化,释放大量促炎因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2等[5,7]。同时,通过加入IL-4、IL-13等因子可诱导M2型极化,表达ARG-1、CD206、IL-10等抗炎标志物。 3. 实验结果可重复性好:相较于原代小胶质细胞,BV
1 ml 2.4 中准备好的 Biotin Elution Buffer,让液流完全进入胶体后孵育 2 min,加入 9 ml 的 Biotin Elution Buffer; 1.13 对于从全血中分选目的细胞,再加入 10 ml 的 Biotin Elution Buffer; 1.14 300 g 转速离心 10 分钟,收集洗脱目的细胞。 流程图: 2. 实验数据 以下流式图为从 7.5 ml 全血中,选出 CD3 + T 细胞的数据。选后细胞以 CD3 -APC (OKT
、CD14-PE、CD19-PE、CD3-PE、CD66b-PE、CD56-PE-Cy7、CD11c-APC、 CD45-AF700、CD38-APC-AF750(每次测试 5μL),以及 CD16-FITC(每次测试 20 μL),并在冰上孵育 30 分钟。10. 在 4℃ 条件下,300 x G 离心细胞 5 分钟。11. 吸取上清液。12. 重悬到 500 μL 染色缓冲液中。13. 通过 CytoFLEX 获取结果。通过 CytoFLEX 进行数据采集:1. 创建新补偿值。2. 如适用
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