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文献和实验- 3) 及 CD45 -PE (HI30,白细胞标志) 抗体染色后,进行流式分析,死细胞以 DAPI 染色先行排除,左右分别为分选前后的细胞群分布。 总结: 几次实验的结果,使用 Fab-TACS® Gravity column 来从全血直接进行 CD3+ T 细胞分选,平均得率为 84.5%,纯度大于 90%,细胞存活率高于 95%,且目标细胞不含标记,贴近天然,使下游实验更精确。
MHC I STREPTAMERS® 检测与分离抗原特异性 (CD8+ T) 细胞
体,实现了对抗原特异性 (CD8+ T) 细胞的检测和分离 (如,流式分析) 。此技术的特点在于,荧光或磁性微珠等标记物可以通过使用 Biotin (生物素) 而去除,保留了细胞的真实特性,得到的功能性的,label-free 的细胞可用于下游的实验研究。 1) MHC I STREPTAMERS® 技术解析 MHC I STREPTAMERS® 由两部分组成: · MHC I-Strep,即连接了 Twin-Strep-tag® 和抗原肽的 MHC I 分子。 · 荧光 (PE/APC)
: 由此步骤开始,流出的溶液包含目标细胞,请使用新的试剂管收集!首先,加入 1 ml 的 biotin 洗脱液,孵育 2 min。其次,加入 10 ml biotin 洗脱液,洗脱目标细胞。d) 再加入 10 ml biotin 洗脱液,洗下剩余的目标细胞。最后两步骤所收集的液体含分选出的目标细胞。(4) 结果分析以下流式图为从 7.5 ml 全血中,选出 CD3+ T 细胞的数据。选后细胞以 CD3-APC(OKT-3) 及 CD45-PE(HI30,白细胞标志) 抗体染色后,进行流式分析,死细胞
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