BCA蛋白浓度测定试剂盒

产品简介

BCA(bicinchoninic acid)是理想的蛋白质定量方法; 是当前比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。

基本原理 

BCA蛋白浓度测定试剂盒在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA 试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

主要特点 

1. 准确灵敏, 线性范围广: BCA 试剂的蛋白浓度测定范围是10－2000ug/ml；

2. 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry 法快4 倍而且更加方便。

3. 经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

4. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。

5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。

运输和储存方法

BCA 试剂 A, B 室温保存，蛋白标准-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。

使用说明

1. 配制工作液: 

根据标准品和样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。

 

1. 分光光度法测定：

2-1．终浓度为0.5mg/ml的稀释：

蛋白标准品完全融化，取100μl BSA蛋白标准（5mg/ml）加入900μl 1XPBS稀释至1ml，使终浓度为0.5mg/ml。

2-2．BSA蛋白标准梯度稀释方法

取8支离心管，按照下表的比例分别加入稀释蛋白标准(0.5mg/ml)和1XPBS。

BSA浓度(μg/mL)	0	25	50	100	200	300	400	500
0.5 mg/mL BSA (μl)	0	15	30	60	120	180	240	300
1X PBS (μl)	300	285	270	240	180	120	60	0

2-3．取20支1.5 mL离心管，分为标准组和样品组。其中16支1.5 mL离心管，每个标准品设置1   个重复，各管分别加入100 μl相应浓度的标准蛋白质溶液；剩余4支1.5 mL离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。其中编号不同的两管加入浓度不同的100 μl样品稀释液。

2-4．各管加入1 mL BCA工作液，迅速混匀。在37°C水浴中保温30 min。

2-5．冷却至室温后，用酶标仪测定 A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

 

2. 酶标板法测定：

3-1．稀释标准品：取 10 微升标准品用 PBS 稀释至 100 微升（标准品一般可用 PBS 稀释），使终浓度为 0.5mg/ml。

3-2．终浓度为 0.5mg/ml的标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加 PBS补足到 20 微升。

3-3．加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中，补加 PBS 到 20 微升。

3-4．各孔加入 200 微升 BCA 工作液，37℃放置 30 分钟。

3-5．冷却到室温，用酶标仪测定 A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

 

注意事项

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品.

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。