Human TNF RI/TNFRSF1A Valukine

Human TNF RI/TNFRSF1A Valukine ELISA Kit

产品信息及操作手册
人 TNF RI/TNFRSF1A ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL212
适用于定量检测天然和重组人肿瘤坏死因子受体 I (TNF RI)/TNFRSF1A
的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factors，TNFs）是多效性细胞因子，被认为是动物在
受伤或感染时产生的炎症和免疫反应的主要调节因子。目前已描述了两种形式 TNF，分
别称为 TNF-α（或恶病质）和 TNF-β（或淋巴毒素），它们的序列有 30%的相似性，
并会竞争性地与相同的受体结合。TNFs 作为宿主抵抗感染和肿瘤形成的介质，发挥着
必要而有益的作用。然而，这些因子的过度产生或不适当表达可导致多种病理状况，包
括消瘦、全身毒性和感染性休克。有关这些因子的文献综述，请参阅参考文献 1 和 2。
TNF 的作用是在因子与细胞表面受体结合后产生的。已经鉴定并克隆了两种不同的 TNF
受体。几乎所有研究过的细胞类型都显示存在其中一种或两种受体类型。其中一种受体
被称为 TNF RII（A 型、a 型、75 kDa 或 utr 抗原），表面分子量为 75 kDa。这种受
体的基因编码一种由 439 个氨基酸（amino acid，aa）残基组成的假定跨膜蛋白（3, 19）。
另一种受体类型被称为 TNF RI（B 型、b 型、55 kDa 或 htr 抗原），其表观分子量为
55 kDa。该蛋白的基因编码一种有 426 aa 残基的跨膜蛋白（4, 5, 19）。两种受体类型
都能与 TNF-α或 TNF-β产生高亲和力结合。这两种受体类型在免疫学上截然不同，但它
们的胞外结构域在四个结构域的半胱氨酸残基位置上显示出相似性（3）。两类受体的
胞内结构域显然无关，这表明两类受体可能采用了不同的信号转导途径。
多个研究小组已在人体血清和尿液中鉴定出可溶性 TNF 结合蛋白，这些蛋白可以中和
TNF-α和 TNF-β生物活性（6-8）。目前已鉴定出两种类型，并命名为 sTNF RI（或 TNF
BPI）和 sTNF RII（或 TNF BPII）。现在已经证明，这些可溶性形式代表了上述两种
TNF 受体的截短形式。可溶性受体形式显然是由于受体的细胞外结构域脱落而产生的，
在健康受试者的血清和尿液中发现的浓度约为 1-2 ng/mL（9, 10）。可溶性受体的水平
因人而异，但对特定个体而言，其水平在一段时间内是稳定的（9）。
在孕妇的羊水和尿液中（11），在与内毒素血症（12, 13）、脑膜炎球菌血症（14）和
HIV 感染（15）等病理情况相关的血清或血浆中，以及在与感染和恶性肿瘤相关的患者
血浆和腹水中（16），都发现了 TNF 受体水平的升高。诱导 TNF 受体脱落的机制尚不
清楚。有报告称，TNF 水平升高与可溶性受体水平之间存在相关性，通常表明导致 TNF
水平升高的刺激也会诱导 TNF 受体脱落（12-14, 17）。然而，也有证据表明，这两种
类型的可溶性受体的脱落是独立调节的（13）。
可溶性 TNF 受体的生理作用尚不清楚。已知两种类型的可溶性受体都能在体外与 TNF
结合，并通过与细胞表面受体竞争 TNF 结合来抑制其生物活性。因此，有人提出，TNF
释放时脱落的可溶性受体可作为一种机制，结合并抑制未立即与表面受体结合的 TNF，
从而保护其他细胞免受 TNF 的影响，并使炎症反应局部化（12, 17）。受体脱落也可能
是使脱落受体的细胞对 TNF 的作用脱敏的一种机制（17）。另一方面，据报道，在 TNF
浓度较低时，与可溶性受体结合可稳定 TNF 并增强其某些活性（18）。因此，在某些
条件下，与可溶性受体结合的 TNF 池可能是稳定和控制释放 TNF 的储存库。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人TNF RI抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人TNF RI会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记
的抗人TNF RI检测抗体进行孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显
色剂）。溶液颜色与结合目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本，人血清样本、人血浆样本和人尿液样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液RD5-5或标准品稀释液
RD6O稀释后重新检测。
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

C. 灵敏度
12次试验检测评估表明，人TNF RI 的最低检测剂量 (MDD)范围 为 0.43-1.20 pg/mL。
平均 MDD 为 0.77 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
该免疫测定法以R&D Systems生产的高纯度的大肠杆菌表达的重组人TNF RI校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人TNF RI，然后用标准品稀释液RD5-5/标准品稀释
液RD6O将样本稀释到检测范围内，测定其线性。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人TNF RI。
将以下因子用标准品稀释液RD5-5/标准品稀释液RD6O配制成50 ng/mL的浓度来检测
与人TNF RI的交叉反应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组人TNF RI对照品
中，来检测对人TNF RI的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
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Recombinant human： Recombinant mouse:
ANG IL-10 EGF
β-ECGF IL-11 IL-1β
EGF LIF IL-3
FGF acidic M-CSF IL-4
FGF basic MCP-1 IL-5
G-CSF MIP-1α IL-7
GROα MIP-1β IL-9
IFN-γ OPG MIP-1α
IGF-I OSM MIP-1β
IGF-II PDGF-AA SCF
IL-1β PDGF-AB TNF RI
IL-1ra PDGF-BB TNF RII
IL-2 RANTES Other recombinants:
IL-3 SLPI amphibian TGF-β5
IL-4 TGF-α chicken TGF-β3
IL-5 TGF-β1 Natural proteins:
IL-6 TGF-β3 bovine FGF acidic
IL-6 R TNF-β bovine FGF basic
IL-8 TNF RII human PDGF
IL-9 TRANCE human TGF-β1