辣根过氧化物酶(HRP)抗体标记试剂盒

HRP是一种从辣根（Armoracia rusticana）根部提取的氧化还原酶，属于过氧化物酶超家族,其可以催化过氧化氢（H₂O₂）对底物的氧化反应，生成有色或荧光产物，常用于信号放大检测，如ELISA,WB,原位杂交，分子生物学，生物传感器应用等。区别于常用的偶联方法，EnkiLife EnAb^TM  HRP抗体标记试剂盒采用定向对接偶联技术将抗体分子与HRP酶共价偶联。

本试剂盒优势：

• 试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质偶联抗体。
• 本试剂盒所配置的HRP为高纯度、高活性，针对底物催化效率更高。
• 本试剂采用定向偶联技术，HRP和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性。
• 试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂，确保不会因为蛋白质位阻而影响应用效果。

标记原理

本试剂盒采用定向对接偶联技术将抗体分子与HRP共价偶联。  

产品组分

标记步骤（适用于标记20μg~80μg抗体）     

1. 抗体样本超滤浓缩换液：取待标记抗体如20μg（纯度>90%），于超滤管滤芯中，并加入不超过超滤管滤芯最大体积的标记缓冲液，14000×g 离心5 分钟，弃去滤液；根据抗体中含有添加物情况可以重复此步骤1次，最后一次超滤完成得到20~30μL，将超滤管滤芯倒置于收集管中，14000 × g 离心1 分钟，收集得到的抗体溶液，根据抗体总量适当补足标记缓冲液至抗体浓度为1mg/ml。同时再将滤芯中补加适量标记缓冲液，保持湿润。

注：若待标记的抗体浓度大于2mg/mL，且不含杂质成分时（如抗体缓冲液为PBS），直接使用标记缓冲液稀释抗体至1mg/mL；

2. 抗体修饰：按照20μg抗体加入0.5μL抗体修饰试剂比例修饰抗体，轻轻混匀后37℃反应60分钟。

3. HRP和抗体偶联：将1管活化的HRP（每管标记20μg~80μg抗体）加入10μL标记缓冲液，移液器吸打或者涡旋混匀溶解后直接加入至修饰后的抗体溶液中，37℃避光反应1.5h或4℃避光过夜反应。

4. 封闭纯化：在300μg 封闭试剂管中加入30μL DMSO 混匀溶解，后按照20μg抗体加0.6μL 封闭试剂，混匀后37℃避光反应30分钟，封闭未反应完的活性基团。将标记混合物再转入至50 KD超滤管,使用标记缓冲液超滤3~5次后回收HRP标记混合物。

5. 保存：此时标记反应完成，HRP标记混合物根据后续应用需求选择性添加HRP抗体保存液至合适浓度（一般要求抗体浓度不小于0.2mg/mL，4℃避光保存，请勿冻存，一般可稳定保存半年以上）。