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- 上海
- 2025年12月25日
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上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
LPS诱导分泌型中耳炎模型
一、模型核心机制
1. LPS的病理作用
- 炎症级联反应：
LPS（脂多糖）作为革兰氏阴性菌细胞壁成分，通过结合Toll样受体4（TLR4）→ 激活NF-κB通路 → 释放TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子 → 导致中耳黏膜血管扩张、通透性增加、黏液分泌亢进 。 - 组织结构破坏：
LPS诱导杯状细胞增生、纤毛倒伏脱落（扫描电镜证实），并促进胶原沉积，导致黏膜增厚及腺体化生 。 - 免疫激活：
补体系统激活 → 中性粒细胞浸润 → 形成Munro微脓肿，模拟人类OME的慢性炎症特征 。
2. 与人类OME的相似性
| 病理特征 | 模型表现 | 验证方法 |
|---|---|---|
| 鼓室积液 | 琥珀色渗出液（48h达高峰，7天消退） | 耳镜观察 |
| 黏膜增生 | 黏膜厚度↑3倍，杯状细胞密度↑50% | HE染色 |
| 听力损失 | ABR阈值↑20-30dB（与积液正相关） | 听性脑干诱发电位 |
二、动物选择与标准化要求
1. 动物品系对比
| 品系 | 优势 | 局限 | 适用场景 |
|---|---|---|---|
| SD大鼠 | 成本低、中耳解剖接近人类（使用率>80%） | 咽鼓管结构差异 | 急性炎症机制/药物筛选 |
| 豚鼠 | 咽鼓管结构与人类高度相似 | 操作难度高、成本高 | 慢性OME及咽鼓管功能研究 |
| C57BL/6小鼠 | 遗传背景清晰，适合基因研究 | 中耳腔小，注射难度大 | TLR4/NF-κB通路机制 |
推荐：选 SD大鼠（雌雄不限，体重200-300g，6-8周龄），SPF级环境适应性饲养7天 。
2. 关键试剂配制
- LPS溶液：
- 浓度：1mg/mL（生理盐水或PBS溶解）
- 现配现用，避光保存（4℃≤24h） 。
- 乳化增强剂（可选）：
纤维蛋白封闭剂（先注入10μL封闭听泡，再注LPS）→ 延长积液持续时间至14天 。
三、造模操作流程（经典经鼓膜注射法）
1. 操作步骤
| 步骤 | 操作细节 | 参数与注意事项 |
|---|---|---|
| 麻醉 | 3%戊ba比妥钠（40mg/kg）腹腔注射 | 避免水合氯醛（增加分泌物干扰） |
| 鼓膜暴露 | 体式显微镜下固定鼠耳，碘伏消毒耳廓 | 防止外耳道损伤 |
| 注射给药 | 微量注射器经鼓膜后下象限穿刺，注入LPS溶液（25-50μL/侧） | 关键：针头斜面朝向鼓岬，避免损伤听骨 |
| 对照组设置 | 对侧耳注入等量生理盐水 | 排除操作本身的影响 |
| 术后观察 | 每日耳镜检查鼓膜变化（混浊、膨隆、积液） | 记录积液出现时间及消退周期 |
2. 改良方案（提高成功率）
- 纤维蛋白封闭法：
先注入10μL纤维蛋白封闭剂 → 5min后注入30μL LPS → 积液持续14天，成功率>90% 。 - 联合诱导法：
LPS注射 + 咽鼓管烧灼（豚鼠）→ 模拟多因素致病，延长病程至28天 。
四、模型评价体系（多维度验证）
1. 临床表型评分（权重40%）
| 指标 | 评分标准 | 检测方法 |
|---|---|---|
| 鼓膜变化 | 0分：正常；1分：轻度混浊；2分：膨隆+积液；3分：穿孔 | 耳镜 |
| 积液量 | 0分：无；1分：微量；2分：充满鼓室1/2；3分：全充满 | 解剖后直接观察 |
| 听力损失 | ABR阈值较基线↑≥15dB为阳性 | 听性脑干诱发电位 |
2. 组织病理学（权重30%）
| 检测目标 | 阳性标准 | 方法 |
|---|---|---|
| 黏膜厚度 | ≥正常3倍（HE染色测量） | HE染色 |
| 炎细胞浸润 | 中性粒细胞/淋巴细胞计数↑2倍 | 高倍镜计数 |
| 纤毛结构破坏 | 纤毛倒伏、脱落≥50% | 扫描电镜 |
3. 分子标志物（权重30%）
| 指标 | 检测技术 | 阳性变化 | 意义 |
|---|---|---|---|
| TNF-α/IL-1β | ELISA | ↑2-3倍（48h峰值） | 炎症激活核心 |
| TLR4/NF-κB | 免疫组化 | 黏膜上皮表达↑80% | 通路激活标志 |
| MUC5AC | RT-qPCR | 黏液基因表达↑4倍 | 杯状细胞增生 |
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