- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0172
- 国产
- 2026年01月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
152
- 英文名：
pcDNA3.1(+) CircRNA Mini Vector
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pcDNA3.1(+) CircRNA Mini Vector
形式：质粒干粉
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5a，5607bp）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验如果有效果好的、适于长片段连接的方法，也请大家指教，多谢。 zitong1983 看了下你的情况，我有几个问题 1）为什么选用BamH1和EcoR1两个酶切位点？ 从pcDNA3.1+载体图谱上看，这两个酶切位点相隔太近，你用双酶切载体制备vector的时候，如何确保两个位点的酶切充分完全？我的建议是，如果不想换酶切位点，线性化载体的时候就采用单酶切的方法，先切EcoRI，取少量产物跑胶确定已经线性化，再切BamHI，胶回收酶切
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