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- 2025年10月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
BC013412.2;HSPC171
- 保质期：
5年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
基本信息
名称：pENTR223-TMEM208人源基因质粒
别称:BC013412.2;HSPC171
复制子:pUC
原核抗性:Spe
克隆菌株:DH5a
培养条件:37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Spe
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens transmembrane protein 208, mRNA (cDNA clone MGC:4574 IMAGE:3030307), complete cds
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3309 bp ds-DNA circular SYN 21-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3309
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 357..373
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 389..487
/gene="mutant version of attL"
/label=attL1
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 488..1006
/label=TMEM208
protein_bind complement(1008..1107)
/gene="mutant version of attL"
/label=attL2
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter complement(1125..1143)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(1148..1164)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 1595..2386
/codon_start=1
/gene="aadA"
/product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy,
1985)"
/label=Spe
/note="confers resistance to spectinomycin and
streptomycin"
/translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH
SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK
RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF
EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP
VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"
rep_origin 2479..3067
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc
61 tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta
121 gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc
181 acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa
241 caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg
301 gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa
361 aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca aataatgatt ttattttgac tgatagtgac
421 ctgttcgttg caacaaattg ataagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa
481 agttggcatg gcgcccaagg gcaaagtggg cacgagaggg aagaagcaga tatttgaaga
541 gaacagagag actctgaagt tctacctgcg gatcatactg ggggccaatg ccatttactg
601 ccttgtgacg ttggtcttct tttactcatc tgcctcattt tgggcctggt tggccctggg
661 ctttagtctg gcagtgtatg gggccagcta ccactctatg agctcgatgg cacgagcagc
721 gttctctgag tatggggccc tgatggatgg tggcatggac ctcaacatgg agcagggcat
781 ggcagagcac cttaaggatg tgatcctact gacagccatc gtgcaggtgc tcagctgctt
841 ctctctctat gtctggtcct tctggcttct ggctccaggc cgggcccttt acctcctgtg
901 ggtgaatgtg ctgggcccct ggttcactgc agacagtggc accccagcac cagagcacaa
961 tgagaaacgg cagcgccgac aggagcggcg gcagatgaag cggttatacc caactttctt
1021 gtacaaagtt ggcattataa gaaagcattg cttatcaatt tgttgcaacg aacaggtcac
1081 tatcagtcaa aataaaatca ttatttgcca tccagctgat atcccctata gtgagtcgta
1141 ttacatggtc atagctgttt cctggcagct ctggcccgtg tctcaaaatc tctgatgtta
1201 cattgcacaa gataaaaata tatcatcatg cctcctctag accagccagg acagaaatgc
1261 ctcgacttcg ctgctgccca aggttgccgg gtgacgcaca ccgtggaaac ggatgaaggc
1321 acgaacccag tggacataag cctgttcggt tcgtaagctg taatgcaagt agcgtatgcg
1381 ctcacgcaac tggtccagaa ccttgaccga acgcagcggt ggtaacggcg cagtggcggt
1441 tttcatggct tgttatgact gtttttttgg ggtacagtct atgcctcggg catccaagca
1501 gcaagcgcgt tacgccgtgg gtcgatgttt gatgttatgg agcagcaacg atgttacgca
1561 gcagggcagt cgccctaaaa caaagttaaa catcatgagg gaagcggtga tcgccgaagt
1621 atcgactcaa ctatcagagg tagttggcgt catcgagcgc catctcgaac cgacgttgct
1681 ggccgtacat ttgtacggct ccgcagtgga tggcggcctg aagccacaca gtgatattga
1741 tttgctggtt acggtgaccg taaggcttga tgaaacaacg cggcgagctt tgatcaacga
1801 ccttttggaa acttcggctt cccctggaga gagcgagatt ctccgcgctg tagaagtcac
1861 cattgttgtg cacgacgaca tcattccgtg gcgttatcca gctaagcgcg aactgcaatt
1921 tggagaatgg cagcgcaatg acattcttgc aggtatcttc gagccagcca cgatcgacat
1981 tgatctggct atcttgctga caaaagcaag agaacatagc gttgccttgg taggtccagc
2041 ggcggaggaa ctctttgatc cggttcctga acaggatcta tttgaggcgc taaatgaaac
2101 cttaacgcta tggaactcgc cgcccgactg ggctggcgat gagcgaaatg tagtgcttac
2161 gttgtcccgc atttggtaca gcgcagtaac cggcaaaatc gcgccgaagg atgtcgctgc
2221 cgactgggca atggagcgcc tgccggccca gtatcagccc gtcatacttg aagctagaca
2281 ggcttatctt ggacaagaag aagatcgctt ggcctcgcgc gcagatcagt tggaagaatt
2341 tgtccactac gtgaaaggcg agatcaccaa ggtagtcggc aaataaccct cgagccaccc
2401 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttacgc gtcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
2461 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
2521 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2581 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc
2641 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
2701 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
2761 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
2821 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc attgagaaag
2881 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
2941 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
3001 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
3061 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
3121 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
3181 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
3241 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
3301 cagctggca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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名称：pENTR223-TMEM208人源基因质粒
别称:BC013412.2;HSPC171
复制子:pUC
原核抗性:Spe
克隆菌株:DH5a
培养条件:37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Spe
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens transmembrane protein 208, mRNA (cDNA clone MGC:4574 IMAGE:3030307), complete cds
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3309 bp ds-DNA circular SYN 21-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3309
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 357..373
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 389..487
/gene="mutant version of attL"
/label=attL1
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 488..1006
/label=TMEM208
protein_bind complement(1008..1107)
/gene="mutant version of attL"
/label=attL2
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter complement(1125..1143)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(1148..1164)
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/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 1595..2386
/codon_start=1
/gene="aadA"
/product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy,
1985)"
/label=Spe
/note="confers resistance to spectinomycin and
streptomycin"
/translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH
SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK
RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF
EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP
VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"
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/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc
61 tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta
121 gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc
181 acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa
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541 gaacagagag actctgaagt tctacctgcg gatcatactg ggggccaatg ccatttactg
601 ccttgtgacg ttggtcttct tttactcatc tgcctcattt tgggcctggt tggccctggg
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721 gttctctgag tatggggccc tgatggatgg tggcatggac ctcaacatgg agcagggcat
781 ggcagagcac cttaaggatg tgatcctact gacagccatc gtgcaggtgc tcagctgctt
841 ctctctctat gtctggtcct tctggcttct ggctccaggc cgggcccttt acctcctgtg
901 ggtgaatgtg ctgggcccct ggttcactgc agacagtggc accccagcac cagagcacaa
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2341 tgtccactac gtgaaaggcg agatcaccaa ggtagtcggc aaataaccct cgagccaccc
2401 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttacgc gtcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
2461 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
2521 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2581 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc
2641 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
2701 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
2761 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
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3181 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
3241 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
3301 cagctggca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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