- ￥1200
- 烜雅生物
- XY-ZL0167
- 国产
- 2026年01月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
160
- 英文名：
Escherichia coli Stbl3(Cyto-roGFP)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：Escherichia coli Stbl3(Cyto-roGFP)
形式：冻干粉
参考用途：Cyto-roGFP质粒提取。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：37℃；18-24h；好氧；
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
①准备无菌水1支，90mm抗性平板2块；
②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；
③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解后液涂布抗性平板，200μL/个；
④将抗性平板置于上述指定条件培养18-24h后进行观察（禁止密封缠绕平板）；
⑤抗性平板上划单，挑取单菌落接种到50mL液体LB抗性培养基中，37℃摇床培养过夜；
⑥根据实验需求，吸取适量菌液进行质粒抽提。
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文献和实验系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
苄青霉素及 140 g/mL X-gal。作为载体的质粒都含有一种或两种抗生素的耐药基因，当把这种质粒转入大肠杆菌后，此菌便获得了抵抗这种抗生素的能力。目前分子克隆所用的克隆载体多含氨苄青霉素耐药基因，所以涉及最多的是氨苄青霉素筛选。当将氨苄青霉素加入培养基中后，只有含质粒的细菌能够繁殖，而不含质粒的细菌则不能繁殖形成菌落。此种筛选不能鉴别重组质粒或自身环化的质粒。在用含氨苄青霉素耐药基因的质粒进行克隆时，转化平板培养基中要加入氨苄青霉素。（四）质粒和菌株的保存:1. 质粒可以在-20 ℃ 冰冻保存。2. 菌株
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