- ￥1200
- 烜雅生物
- XY-ZL0009
- 国产
- 2025年12月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
105
- 英文名：
Escherichia coli DH5α(pBR322)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：Escherichia coli DH5α(pBR322)
形式：冻干粉
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：
1. 准备无菌液体试管 1 支（含培养基 5~10mL），90mm 平板 2 块；
2. 西林瓶管壁消毒后，无菌环境下，依次打开铝盖与胶塞，吸取约 0.5mL 液体培养基打入瓶中，轻轻吹打溶解菌片；
3. 菌片充分溶解后，将溶解液全部吸出，打回液体试管混匀；
4. 从试管液体中吸取混合液涂布平板，200μL/个；
5. 将试管和平板全部置于上述指定条件培养，禁止密封缠绕平板，18-24h 后观察培养液明显浑浊，平板菌落或菌苔生长；
6. 如菌种未生长，应继续培养至 72h，培养好后按照试验需求具体使用。 存储条件 -20℃ 安全等级 1 参考用途 pBR322质粒提取。
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文献和实验法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
都中止。但松弛型质粒仍继续进行复制。因此在增殖松弛型质粒时，总是要让宿主菌经氯霉素处理（在培养液中加入适量的氯霉素）抑制蛋白质的合成。图23-3 pBR322的基本结构（一）大肠杆菌质粒应用的最广泛的质粒载体是pBR322，它属松弛型质粒，有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因，有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸，排列顺序已全部测定，基本结构如图23-3。当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆
臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分
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