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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
121
- 英文名:
Escherichia coli HB101(pRK2013)
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
冻干粉
英文名称:Escherichia coli HB101(pRK2013)
培养基:基础培养基(英文名:LB):酵母膏 5.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 10.0g,蒸馏水 1.0L,pH 7.0。121℃,15min灭菌。
生长条件:37℃;18-24h;好氧
存储条件:2-8℃
安全等级:1
操作步骤:
①准备无菌水1支,90mm抗性平板2块;
②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;
③吸取0.5mL无菌水打入冻干管,充分溶解后液涂布抗性平板,200μL/个;
④将抗性平板置于上述指定条件培养18-24h后进行观察(禁止密封缠绕平板);
⑤挑取单菌落接种到50mL液体LB抗性培养基中,37℃摇床培养过夜;
⑥根据实验需求,吸取适量菌液进行质粒抽提;
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文献和实验后,不能稳定地共存于细菌的一个单细胞中,称之为不相容性质粒。例如:带有ColEl和pMBl复制子的质粒彼此不相容;而带有pSC101和p15A复制子的质粒却彼此相容。(3)转移性:在自然条件下,许多质粒都能通过细菌结合作用转移到新宿主菌内,而质粒上的mob基因为转移所必需的基因;同时在质粒上还需要nic/bom位点。(4)赋予宿主细胞一些遗传表型,如对抗生素的抗性。 mnidr 谢谢版主,那请问一下,原始的野生型大肠杆菌含有质粒吗?含有的是一种还是几种质粒呢?是固定
, 1ml 转至50 ml LB, 37oC 250 r/m至 A600=0.... 液氮或低温冰箱中取出的 大肠杆菌 *E.COLI DH5, JM109,HB101等,在LB平板上划线,37度过夜至长出单菌落.挑直径1-3毫米的单菌落*可多个, 接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升 锥形瓶 的SOC培养基. 培养基 量不可再多,会影响效率.在18度 150
观察到。 三.实验材料 受体菌:E.coli K12 HB101 质粒:pGLO plasmid 转化液(CaCl2) 氨苄青霉素(amp) 阿拉伯糖(ara) 培养基:固体LB、液体LB 接种环、移液器等 四.实验步骤 1. 准备平板: 每组:1块LB平板,2块LB/amp平板,1块LB/amp/ara平板 2. 准备感受态细胞:用250µl无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉,此即感受
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