Cas14a 切割底物-ssDNA-荧光型DNA-FAM-B

诺奖得主 Jennifer 最新研究：CRISPR/Cas12c 无需切割 DNA 就可实现基因沉默，抵御病毒入侵

与 DNA 结合依赖于 pre-crRNA 的加工 上述的实验已经证明 Cas12c 不进行靶 DNA 切割，那么 Cas12c 是否能结合经由 RNA 引导的互补底物？结合筛选实验表明，Cas12c 在低纳米摩尔范围内可结合目标 dsDNA，并对部分碱基配对的 DNA 具有更强的亲和力。因此，这些数据表明，像其他 Cas12 酶和 Cas9 一样，Cas12c 也与目标 ssDNA 具有较高的结合亲和力但不能检测到与 ssRNA 结合。 图片来源：Molecular Cell Cas12c

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

靠近 5』端的公共部分，保证每个 isoform 都会成功移码突变 通常情况下，为了便于下游 KO mutants 的鉴定，我们往往可以作如上设计：即 Cas9 的切割位点刚好被一个酶切位点跨过，且附近至少 100 bp 内酶切位点唯一。 为了减少 Off-Target 效应，请把设计好的 Target 放在括号中的网址里去做预测，尽量找到一条脱靶效应较小的来继续下游实验。 20 nt 确定之后，请

CRISPR-Cas9 技术敲除酵母菌 ADE1 基因

选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE