Beyo3D™ DAPI染色液

碧云天研发生产的Beyo3D™ DAPI染色液(Beyo3D™ DAPI Staining Solution)，也称3D细胞核染色液(3D Cell Nuclear Staining Solution)，是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的细胞核染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的细胞核蓝色荧光染色。如果细胞球或类器官中有凋亡细胞，其细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。本产品不仅可以用于常规的细胞核染色，也能用于监测细胞凋亡等细胞核异常现象。

DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl，分子量为350.25，CAS Number 28718-90-3。

DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB (ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。

本产品适用范围广。本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、Matrix-Gel™基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。不仅可以用于常规的细胞核荧光染色，也能用于检测细胞凋亡。

本产品使用便捷，整个实验过程仅需约10-30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色，仅需加入本产品避光孵育10分钟即可进行荧光检测，也可以固定后再加入本产品进行染色。本产品固定后染色效果优于活细胞直接染色效果。本产品和适用于2D细胞的DAPI染色液(C1005)对3D培养的HCT-116和HeLa细胞的染色效果对比参考图1。

图1.碧云天Beyo3D™ DAPI染色液(C1341)和DAPI染色液(C1005)对于3D培养的HCT-116和HeLa细胞的染色效果对比图。5000个HCT-116细胞和1000个HeLa细胞在使用碧云天3D细胞培养包被试剂盒(U形底96孔板) (C0366)包被的U形底96孔板中培养48小时，固定组每孔先加入100μl免疫染色固定液(P0098)固定3D细胞球10分钟，然后固定组(Fixed)和活细胞组(Live)再分别用DAPI染色液(C1005)即2D DAPI和Beyo3D™ DAPI染色液即Beyo3D™ DAPI染色10分钟。结果显示，Beyo3D™ DAPI染色液对于3D细胞的染色效果显著优于适用于2D细胞的DAPI，且固定后的染色效果更明显。实际检测效果会因细胞株、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低[1-3]。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反应细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果[4-5]。

3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞，其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气，而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少，形成自然的营养和氧气梯度，能更好地模拟体内微环境条件，因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤，更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究，也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时，2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性，在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性，出现优势克隆选择性，从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型，3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果，简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今，3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统，并成为生命科学最热门的领域之一。

按照96孔板每孔100μl Beyo3D™ DAPI染色液，本产品每10ml包装可以进行100个样品的检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C1341S	Beyo3D™ DAPI染色液	10ml
C1341M	Beyo3D™ DAPI染色液	50ml
C1341L	Beyo3D™ DAPI染色液	200ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC避光保存，一年有效。

注意事项：

本产品反复冻融可能会降低染色效果，为保证最佳使用效果，请尽量避免反复冻融，第一次解冻后可以适当分装保存。

细胞球在外力的作用下容易变形或分散，固定细胞球、PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。

本产品浓度经过碧云天的优化，确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的DAPI，请选购碧云天的DAPI (C1002)。

荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(P0126)可以向碧云天订购。

尽管3D细胞球可以用本产品直接进行活细胞染色，但是为达到最佳染色效果，建议先用免疫染色固定液(P0098)进行固定后再进行染色，效果更佳。

DAPI对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。