离子交换层析

离子交换层析是目前蛋白质分离纯化中应用最广泛的方法之一，不同蛋白等电点差异，分子大小差异，在同一个流动相中电荷密度分布不同，电荷量不等，与具有相反电荷的离子交换介质结合强度不同，在流动相洗脱时保留时间不同，从而得以分离。
为度生物供应SP、Q、CM、DEAE共4种配基，有Focurose FF、Focurose HP、Focurose XL、Focurose HPR等基质组合而成的多种离子交换介质，精准匹配生物工艺下游技术纯化方案。


介质选择原则
★初步捕获阶段选择流速快，载量高的离子交换介质如XL基质的介质。
★中度纯化阶段选择载量高，且分辨率高的离子交换介质如FF/XL基质的介质。
★精细纯化阶段选择分辨率高，且回收率高的离子交换介质如HP/FF/HPR基质的介质。

离子交换层析介质
1.高流速、高分辨率系列
高流速琼脂糖基质离子交换介质是以高强度交联6%的琼脂糖微球为基质，连接配基DEAE/CM/Q/SP制成。

-产品优势：
★快速、简单、便利。
★使用范围广，适用于所有带电的生物分子的组分分离或精细纯化。
★载量高（相对于其它类型的层析介质）。
★纯化工艺灵活性高，可以通过前期纯化工艺条件筛选来提高样品纯度。

-应用案例：
DEAE Focurose FF分离重组蛋白
样品：20mL(大肠杆菌表达的重组蛋白)
柱子：HT01,1.0mL
缓冲液：A液(20mM PB,pH7.5)
             B液(20mM PB,1.0M NaCl,pH7.5)
流速：上样0.6mL/min,其它1mL/min


-蓝耳全病毒纯化工艺（高纯度/高回收率两种方案）
1、DEAE 弱阴离子洗脱模式-高纯度
悬浮培养蓝耳病毒样品经离心过滤后可以直接上样纯化，该纯化工艺中，病毒吸附在洗脱液中，蛋白去除率≈98%，回收率＞60%。

2、Q Focurose FF洗脱模式-高回收率
该纯化工艺中，蓝耳病毒吸附在洗脱液中，蛋白去除率≈75%，回收率＞70%。


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2.超高载量系列
超高载量琼脂糖基质离子交换介质是由高强度6%的琼脂糖插入线性的葡聚糖分子，使其和蛋白结合时的空间位阻减小，并且增加了离子交换配基的密度，从而使结合载量大幅度增加，称为Focurose XL。

-产品优势：
★超高的载量能从样品中捕获更多目的物质，性价比极高。
★在高流速下仍然有很高的动态结合载量。
★适用于所有生物分子（疫苗，病毒，蛋白，多糖）的快速纯化。

-应用案例：
高流速琼脂糖基质离子交换介质（DEAE Focurose FF）和超高载量琼脂糖基质离子交换介质（DEAE Focurose XL）结合载量对比
样品：10mg/mL BSA,上样40mL(饱和上样)
柱子：HT01,1.0mL
平衡液：0.02M Tris-HCl,pH8.5
洗脱液：0.02M Tris-HCl,1.0M NaCl,pH8.5
流速：1mL/min


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3.高刚性系列

高刚性琼脂糖基质离子交换介质是由高强度交联的琼脂糖交联纤维素基质，偶联不同的配基构成的离子交换介 质。比高流速琼脂糖基质介质有更高的刚性，传质速度更快，耐受性更强，线性的纤维素分子插入琼脂糖中，载量也有所提高。
琼脂糖和纤维素交联的基质具有良好的生物相容性，使其在纯化疫苗等生物大分子时有很高的回收率并保持生物分子的活性。高刚性也使其具有很高的流速，在工业生产中可有效提高品质，降低成本。

-应用案例：
SP Focurose HPR纯化重组某激酶上清液
平衡液：50mM PB，pH 6.5
洗脱液：50mM PB，1M NaCl，pH 6.5


SP Focurose HPR纯化重组三型胶原蛋白
平衡液：20mM PB，pH 6.0
洗杂：20mM PB，100mM NaCl，pH 6.0
洗脱：20mM PB，300mM NaCl，pH 6.0
再生液：20nM PB，1M NaCl，pH 6.0
用强阳离子结合模式进行线性洗脱，纯度达到80%


SP Focurose HPR纯化圆环疫苗
平衡液：0.05M NaAc,pH5.0
洗脱液：0.02M PB,0.5M NaCl,pH8.0


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