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- 武汉
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
2-3年
- 供应商：
智立中特（武汉）生物科技有限公司
- 保存条件：
-80
- 规格：
甘油管
货期：款到7个工作日左右出库
运输：冰袋泡沫盒快递
培养方式：37℃
保存：2ml甘油管，-80℃
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galUgalK rpsL (StrR) endA1 nupG
特点：1.TOP10菌株来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似（DH10B 为 galE15 型，而 TOP10 为 galU 型）。2. 生长速度快（比 DH5α快，但比 Mach1-T1 生长速度慢），10 小时可见克隆3. recA1和endA1的突变,有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。3.存在lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具链霉素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg DNA。
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
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