裸鼠皮下成瘤动物模型

裸鼠皮下成瘤动物模型的构建方法及实验流程

1. 实验准备

1.1 细胞准备

细胞株选择：根据实验目的选择合适的肿瘤细胞株，如HCT116（结直肠癌）、A549（肺癌）等。

细胞培养：在无菌条件下于合适的培养基（如DMEM + 10% FBS）中培养细胞，确保细胞生长状态良好（对数生长期，贴壁细胞80%-90%融合）。

细胞收集：

胰蛋白酶消化细胞，终止消化后低速离心（800-1000 rpm，5 min），弃上清，用PBS洗涤2次。

计数细胞，调整细胞浓度（通常为1×10⁶ ~ 5×10⁶ cells/100 μL PBS + Matrigel混合物）。

低温保存细胞悬液（冰上放置，防止细胞沉降），准备接种。

1.2 小鼠准备

小鼠品系选择：

免疫缺陷小鼠（如BALB/c裸鼠、NOD/SCID、NSG小鼠）：适用于人源肿瘤细胞接种，避免免疫排斥。

C57BL/6或BALB/c：适用于小鼠来源的肿瘤细胞接种。

适应性饲养：

实验前至少1周进行适应性饲养（SPF环境）。

控制温湿度（22-25°C，40%-60%湿度）。

给予无病原水和饲料，减少环境应激。

2. 皮下接种

2.1 接种步骤

麻醉：根据需要选择合适的麻醉方法。

接种：

左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩处皮下注射，接种时，针头在皮下进针深一点，约1 cm深，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出，接种体积为200 μL。

此过程尽量在半小时内完成，途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象。

3. 肿瘤测量与观察

测量：定期使用卡尺测量肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积（体积 = 长径 × 短径² × 0.5）。

观察：观察肿瘤的生长情况，记录肿瘤的大小、颜色和质地等。

4. 实验终止与样本收集

终止实验：当肿瘤体积达到一定大小（如1.5 cm³）或实验达到预定时间时，终止实验。

样本收集：处死小鼠，取出肿瘤组织，进行固定、切片和染色等处理，用于后续的组织病理学分析。

5. 数据分析

数据分析：根据实验目的，对肿瘤的生长曲线、组织病理学结果等进行分析。

统计分析：采用适当的统计方法对数据进行分析，评估实验结果的显著性。