大鼠子宫平滑肌细胞永生化

背景介绍

子宫肌层比较厚，由成束或成片的平滑肌组成，肌束间以结缔组织分隔。子宫平滑肌具有收缩功能，收缩受激素的调节，其收缩活动有助于精子向输卵管运送、经血排出以及胎儿娩出。子宫平滑肌细胞的分裂增殖还受性腺激素的影响。子宫肌瘤的发病机理是由于子宫平滑肌在高水平雌激素作用下过渡增殖形成。

大鼠子宫平滑肌细胞永生化产品基本信息

细胞名称：大鼠子宫平滑肌细胞永生化

种属来源：大鼠

组织来源：正常子宫组织

细胞形态：梭形细胞，不规则细胞

生长特性：贴壁生长

培养基:：大鼠子宫平滑肌细胞-永生化细胞专用培养基。

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

大鼠子宫平滑肌细胞永生化培养操作

大鼠子宫平滑肌细胞永生化复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

大鼠子宫平滑肌细胞永生化传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

大鼠子宫平滑肌细胞永生化冻存步骤

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。

7. 说备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

8. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。