蛋白质质量表征分析服务

蛋白质质量表征分析服务

1.质量表征

蛋白质质量表征包括分子量大小、粒径大小、稳定性、聚集状态等。蛋白质的均一性、所处的溶液环境、构象或胶体稳定性都可能决定蛋白质的长期稳定性。

佰莱博生物搭建了基于AUC分析型超离技术、nanoDSF差示扫描荧光技术、SEC-MALS尺寸排阻色谱法与18角度激光光散射检测联用技术的质量表征分析服务平台。分析型超速离心机（AUC）可用于确定蛋白质或其他大分子的相对分子量、绝对分子量、分子形态信息、聚集状态、相互作用分析、纯度及均一性分析、化学计量比、流体动力学和热力学参数等。nanoDSF蛋白质稳定分析系统可提供溶解温度(Tm)&聚合温度 (Tagg)值，同时具有加样简单、无需标记、高通量(48 samples)、低样品量（10ul/sample）等特点。尺寸排阻色谱法与18角度激光光散射联用(SEC-MALS)可以直接计算出分析物的绝对分子量，确定样品的聚集状态与纯度，可满足整个药物研发，工艺开发，产品质量控制等环节的检测需求。动态光散射（DLS）可以提供分子粒径大小，样品消耗量少(4-10ul/sample)。

AUC分析型超速离心机

与用于分析大分子的其他方法不同，分析型超速离心机（AUC）能够在生物相关溶液条件下对样品在天然状态时进行表征，无需对样本进行标记，检测过程不破坏样本，样本可回收再利用。分析型超速离心机（AUC）可用于确定蛋白质或其他大分子的相对分子量、绝对分子量、分子形态信息、聚集状态、相互作用分析、纯度及均一性分析、化学计量比、流体动力学和热力学参数等，是最通用、最严格且最精确的大分子表征技术技术。它可用于研究在广泛的浓度和各种各样的溶剂中几乎任何一种类型的分子或颗粒。

在高速旋转产生的强大的离心力作用下，分子量或构型不同的分子在溶液中的沉降系数不同，从而呈现出不同的沉降速度和浓度分布特性。分析超离的检测系统会实时扫描分子在离心过程中的沉降过程，对样品的超速离心分离过程实现了“可视化”的实时检测，并根据扫描所取得的数据计算出分子的特性。分析超离的分析方法主要有沉降速率（Sedimentation Velocity,SV）和沉降平衡（Sedimentation Equilibrium,SE ）两种。

SEC-MALS系统原理

SEC-MALS&DLS系统

基于蛋白质分子尺寸大小不同而分离的色谱方法。尺寸排阻法（SEC）提供分离功能，大颗粒不能进入到凝胶填料孔隙中，因而他们流经较短的路径被很快洗脱出来，小颗粒能进入凝胶填料孔隙中，因而需要流经较长的路径才能被慢慢洗脱出来，实现按照分子尺寸的大小进行各组分的分离。通过SEC分离后的各组分进入到多角度光散射检测器（MALS），激光照射到各组分时会发生光散射，多个角度同时测定散射光的强度，散射光强度正比于摩尔质量、浓度、折光指数增量的平方。当散射光强度、浓度、折光指数增量的平方已知后，通过公式可以直接计算出分析物的绝对分子量。除了可得到大分子物质的分子量、分子粒径和分子形状以外，还可得到分布、分支、聚集态及粘度参数等信息，并可监测反应的动力学过程，且测量过程中无需任何标样。SEC-MALS具有较高的灵敏度和准确度及广泛的适用性，无论是分析高温树脂PP、PE、PS，超高分子量电解质，还是生物大分子蛋白质、多糖、DNA，病毒等，它都能迅速而准确地提供可靠的分子量等数据。

样品类型

重组蛋白、抗体、多肽（需提供柱子和方法）；高分子材料、纳米颗粒等

动态光散射仪

动态光散射（DLS）可测量随时间变化的散射光，这些波动是与分子通过溶剂的扩散速率直接相关，可用于测量溶液中颗粒的流体动力学半径（Rh）。溶液中样品颗粒的单分散性和聚集状态可以通过DLS在几分钟内对Rh进行评估。DLS可用于监控在蛋白质纯化各阶段的样品质量。

样品类型

粒径测定：不限类型（粒径为nm级别即可）

NanoDSF蛋白稳定分析系统原理

 

NanoDSF通过检测蛋白分子中芳香族氨基酸(Trp, Phe)的内源性荧光330nm和350nm发射属性的改变，从而得到蛋白变性曲线，计算出蛋白稳定性参数Tm；蛋白变性过程中，其构象逐渐打开，疏水位点逐渐暴露，达到一定程度（温度）时，蛋白分子开始聚集，采用背散射光技术检测蛋白聚集稳定性，确定蛋白聚集起始温度Tagg。nanoDSF 技术可精确测定蛋白的变性温度(Tm和Tonset)、变性剂浓度(Cm)、折叠自由能(ΔG和ΔΔG)以及蛋白形成聚集的起始温度(T agg)，是一种快速而精确的免标记分析方法。不但可以精确分析蛋白稳定性，验证生物药功能性和长期稳定性，轻松筛选制剂条件，评估生制品品质，而且大大节约时间和宝贵样品。通过了解影响蛋白稳定性的温度和化学条件，对蛋白功能进行更深入的剖析，从而全面了解蛋白质的折叠特性和结构域。

样品类型

Tｍ&Tagg值测定：重组蛋白、单抗、双抗、ADC、AAV和LNP