硫酸钠

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS―PAGE)

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS ― PAGE) 第二相聚丙烯胺 胺凝胶的选择主要取决于需要分离蛋白质的相对分子质量的范围，这与单相的聚丙烯酰胺凝胶电泳的选择是相同的。当蛋白质相对分子质量在15 000～200 000时，电泳迁移率与相对分子质量的对数呈线性关系。SDS―PAGE不仅可分离蛋白质，且可在一定范围内粗略测定蛋白质的相对分子质量。其主要步骤如下。 (1)凝胶配制及灌胶：胶浓度越高，所分离蛋白质的相对分子质量范围也越大。薄的胶，其染色和脱色快，且背景

免疫金银染色（IGSS）操作流程

的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min.（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.（10）1%戊二醛洗10min.（11）双蒸水洗5min.（12）1%明胶洗5min.（13）银避光显影8~15min.（14）双蒸水洗15min.（15）固定：用显影定影液（1:4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min. （16）衬染，核固红衬染3min或甲基绿衬染3min. （17）常规

免疫金银染色双PAG法

%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3rain，或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min. （20）衬染：核固红衬染3min或甲基绿衬染3min. （21）常规脱水，树胶封片。 （22）镜检：阳性物质呈黑色或黑褐色，颗粒分布于抗原-抗体反应部位；背景较干净，呈红色。 （二）双PAG法的敏感性 应用本法对keratin、AFP、HBsAg、FN、SOD、HCG、F8、P53等组织抗原的定位，连续4gm石蜡切片，同时用IGSS和双PAG法，不同的一抗稀释度，结果双PAG法