碱性磷酸酶染色试剂盒（红色）

碱性磷酸酶染色试剂盒（红色）
描述：
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)，也称碱性磷酸酯酶，是动物和微生物生理过程中一种非常重要的酶，常见于具有活跃转运功能的细胞膜内，如肾近曲小管的刷毛缘、小动脉内皮、肝脏毛细胆管膜、肾上腺、膀胱、肠上皮、附睾上皮的静纤毛等处。在碱性环境中可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。碱性磷酸酶与人类疾病如高磷酸酯酶血病、一些骨骼和肝脏疾病的发生有关，被用作很多疾病的辅助诊断依据；检测碱性磷酸酶的活性对于环境监测、食品质量控制等方面具有重要的作用。此试剂盒采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，结果较金属盐沉淀法灵敏可靠。该试剂盒可用于骨髓或细胞涂片、冰冻切片和梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，其染片数50~100张。
原理：
碱性磷酸酶在一定的碱性环境中，将底物磷酸萘酯水解，产生α-萘酚，α-萘酚再与重氮剂固红偶联形成红色偶氮沉淀物，定位于细胞浆中，沉淀物显示的颜色深浅与碱性磷酸酶活性成正比。用试剂盒提供的染液B复染后，细胞核呈蓝色，而含碱性磷酸酶的细胞质呈红色，对比鲜明。红色偶氮沉淀物的生成反应如下图所示：
操作步骤： 
1. 将固红试剂管短暂离心，以防开管后，固hong粉末损失，每管加纯水1.25ml溶解固红。固红溶液最好在使用当天配制。
2. 取适量固红溶液与染液A按1:3的体积比混匀，用细菌滤器过滤，除去其中的渣滓及沉淀物。（剩余的未与染液A混合的固红溶液，根据下次的预期用量，分装密封避光保存于-20℃，避免反复开封与冻融，一个月内有效。）
3. 将滤液滴加到玻片组织细胞处，若是组织切片，避光室温孵育3~15min；细胞涂片或石蜡切片，避光室温孵育30~40min，若着色过浅，可适当延长孵育时间，但不要超过1.5h。
4. 自来水流水洗1-2min，流水不能直接冲在组织上，水流速度不能快，以免损坏组织。
5. 滴加染液B复染，室温孵育1-3min，水洗，方法同步骤4，若着色过浅，可适当延长孵育时间。
6. 镜检，或封片后镜检。