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- 91513
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
Fruit/Seed Total RNA Mini Kit
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
果实/种子总 RNA 提取试剂盒
Fruit / Seed Total RNA Mini Kit
目录号：91513
产品内容
|
产品成份 |
91513-50（50 次） |
|
裂解液 FSL |
50 ml |
|
裂解液 ARL |
25 ml |
|
去蛋白液 RW1 |
40 ml |
|
漂洗液 RW |
10 ml（需加入指定量无水乙醇） |
|
RNase-Free H2O |
5 ml |
|
gDNA 过滤器和收集管 |
50 套 |
|
RNA 吸附柱和收集管 |
50 套 |
|
RNase-Free 1.5ml 离心管 |
50 支 |
保存条件
室温（15 ~ 25℃），有效期 12 个月。
自备试剂
无水乙醇，β-巯基乙醇
产品简介
适用于快速提取果实、种子、中草药的总 RNA，gDNA 过滤器能高效滤除 gDNA， RNA 可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普通转录组测序、RACE、芯片等。
成功案例：稻谷种子、玉米种子、小麦种子、葡萄果实、板栗、樱桃、草莓、芒果、百合鳞茎、唐菖蒲的球茎、中草药的块根...
如果遇到果实、种子、中草药，例如：多糖多酚巨高的作物种子（小麦/玉米/大豆/水稻）、葡萄果实、蓝莓果实、百合鳞茎、土豆块茎；或者次级代谢产物巨丰富的葛根、虎杖、雪莲等药用植物，请选择 91513-果实种子总RNA 提取试剂盒。
产品特点
1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全过程仅需 30min！
注意事项
1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，请将其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。
2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。
操作步骤：
重要提示：
① 第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，加入量详见瓶身标签。
② 操作前，取 1ml 裂解液 FSL 至 2.0ml 离心管内，加入 5%的 β-巯基乙醇
（例如：1ml FSL 加 50μl β-巯基乙醇），颠倒混匀后，65℃水浴中预热。多个样本按比例放大准备。
③ β-巯基乙醇是裂解液 FSL 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到10～20%，来防止样品褐化。如果碰到特别复杂的植物，可以尝试在裂解液中再加入 PVP40 至终浓度 2%。
④ 所有离心步骤均需要在室温（15℃～25℃）下进行。
1. 材料处理：
a．将植物样本在液氮中迅速研磨成细粉。
b．转移 30～200 mg 细粉至 65℃预热的裂解液 FSL（已加有 β-巯基乙醇）中，立即剧烈涡旋震荡 30 Sec，充分混匀。
注意：水分多的样品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg； 水分含量少的样品（如成熟的小麦/玉米/大豆种子）投入 30～40 mg； 淀粉含量高的块茎投入 40～80mg；叶片投入 50～100 mg。
c．短暂回放至 65℃水浴 5 min，中间偶尔颠倒 1～2 次，帮助裂解。
d．将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
e．转移上清（约 800~900 μl）至新的 2.0 ml 离心管中，加入 0.5 倍体积的无水乙醇（约 400~450 μl），吹打混匀。
2. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管），13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。重复此过程，直到混合液全部转入gDNA 过滤器。此时，绝大部分 gDNA 被滤除，RNA和少量gDNA残留被吸附在膜上。
3. 取出步骤2的gDNA过滤器，放入一个新的2.0 ml离心管中，加入500 μl 裂解液 ARL，13,000 rpm 离心 30 sec，收集滤液（RNA 在滤液中），向滤液中加入 250μl 无水乙醇，吹打混匀。
4. 将滤液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。
5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室温放置1min，13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。
6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
7. 重复步骤6一次。
8. 将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心2 min，除去膜上残留的乙醇。
9. 取出RNA吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50μl的RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心1min。
10. 提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
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究蛋白A的理论滴定曲线时，终于找到了理论依据。原来蛋白A的理论等电点虽然为9.7，但在滴定曲线上，从9.7到6.5的很长一段曲线都是平缓的。也就是说从pH9.7到pH6.5，蛋白A所带的净正电荷都很少，只有0—1个单位左右。当pH为5.8时，蛋白A的净正电荷达到3个单位，这时才能有效吸附。通过本例也可以发现，决定蛋白吸附的不是等电点的差异多少，而是所带净电荷的多少。可能一个蛋白质x比蛋白质y的pI高，但在某个pH时，蛋白y可以吸附阳离子柱，而蛋白x却吸附不好。所以，在理论上，做纯化要善用滴定
3个单位，这时才能有效吸附。通过本例也可以发现，决定蛋白吸附的不是等电点的差异多少，而是所带净电荷的多少。可能一个蛋白质x比蛋白质y的pI高，但在某个pH时，蛋白y可以吸附阳离子柱，而蛋白x却吸附不好。所以，在理论上，做纯化要善用滴定曲线的差异，特别是小分子的蛋白质，它们普遍有着净电荷与pH不敏感的现象。 90mM NaCl洗脱杂蛋白峰和后面的线性梯度洗脱都是多次小试试验优化的结果。细心点的战友可能会发现，此步中，样品在上柱前调节完pH后并没有经过换液或透析操作，就直接上样了。样品的pH
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