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文献和实验真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA
。 4、培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？ 多数情况下，细胞在体外培养时需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下两种方法： 将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 >10 h 以去除血清外泌体； 选择无血清完全替代培养基进行细胞培养。 5、无外泌体血清（或者外泌体专用培养基）在什么时候使用？ 使用无外泌体血清培养基：细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞汇合度在60% - 70% 时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基，继续
间充质干细胞培养基，细胞培养24小时后，再替换为完全的外排体专用间充质干细胞的进行。 20、关于外泌体红色荧光标记染料（PKH26 / PKH67 ）相关实验事项注意事项 a、建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到0.5~1μg/μL。外泌体浓度过低实验失败风险较高。 b、外泌体染色步骤中去除游离染料的第4、5步必备，以色列游离染料对更新实验的干扰。这一步即将重新去除外泌体，所有外泌体去除封闭方式均适用。 c、去除游离染料的方法是按照外泌体提取方法再次提取外泌体，推荐umibio外泌体提取纯化试剂盒
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