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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
100管/96样
乳酸脱氢酶（LDH）活性微量法测定的原理是通过检测LDH催化丙 酮酸还原为乳酸的过程中NADH的生成量来间接测定LDH的活性。
具体过程如下：
反应原理：在LDH的作用下，NAD+被还原生成NADH。NADH与WST-8相互作用产生颜色，从而进行比色测定（λmax=450 nm）。
反应条件：LDH将NAD还原为NADH，NADH与WST-8相互作用产生颜色。这个反应在冰上避光进行，各组分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在实验前从冰箱中取出并平衡至室温，整个过程需避光操作。
吸光度测量：在450 nm波长下测量吸光度，吸光度与LDH活性成正比，可以通过比色法测定LDH的活性。
实验步骤和所需设备：
实验步骤：准备工作液（1×Assay Buffer、NAD、WST-8、Enhancer和Lactate混合均匀），将工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中，加入待测样品，37℃恒温孵育一定时间后测量吸光度。
所需设备：酶标仪或可见分光光度计（能测450 nm处的吸光度）、恒温箱、制冰机、低温离心机、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、去离子水、匀浆器（如果是组织样本）。
实验注意事项：
试剂保存：各组分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在冰上避光保存，避免反复冻融。
操作注意事项：整个实验过程需在冰上避光进行，避免光照影响结果。
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文献和实验MTT的替代产品—XTT，WST-1，CCK-8（WST-8）
的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高 4 、 CCK-8 法或称 WST-8 法 CCK-8 试剂中含有 WST–8 ：化学名： 2- （ 2- 甲氧基 -4- 硝基苯基） -3- （ 4- 硝基苯基） -5- （ 2 ， 4- 二磺酸苯） -2H- 四唑单钠盐，它在电子载体 1- 甲氧基 -5
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
kandr20051 最近在做细胞实验，用的是WST-1检测细胞活性。在检测的前72个小时，实验都符合预期，给药组的OD值比阴性对照组的要低，但是到了96个小时以后，WST-1的结果就逆转了。给药组的OD值远远高于阴性对照组。 但最奇怪的是，WST-1的检测结果与我镜下观察到的细胞形态和多少完全不同！ 这是阴性对照组 这是给药组的 为什么会出现这种结果呢？
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