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文献和实验了一线技术支持常被问到的问题,希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪,早日驾驭 IP、co-IP。 IP、co-IP、pull-down 简介 IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和IP类似,通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原,bait protein)特异
稳定剂和防腐剂,但是过氧化物酶标记的抗体里面不含防腐剂。 亲和层析纯化抗体的选择和定位 第一步: 选择 Whole IgG 、 F(ab ’)2 片段,或者 Fab 片段抗体。 我们提供三种亲和纯化的二抗: Whole IgG , F(ab ’)2 片段, Fab 片段。 Whole IgG 抗体是从抗血清中分离出来的完整的分子。这些抗体有一个 Fc 部分和两个与抗原结合的 Fab 部分,因此是二价的(图 1 )。它的平均分子量约
。 (6)再次洗涤后,用含0.01%硫柳汞的PBS重悬微珠。 (7)检测微珠样品与抗体结合前后的结合效率,将样品分别加入Laemmli样品缓冲液中煮沸。分别取出相当于1/Il和9btl的两种样品,在10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳,用考马斯亮蓝染色。结合前样品呈现重链区带(分子质量为55kDa)而结合后样品则无,表明交连成功 亲和层析柱在含硫柳汞缓冲液中置4C可保存1年以上。制备好的微珠即可用于抗原的免疫亲和纯化。 蛋白A/蛋白G微珠—抗体
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