IP9331 PBS-0.1%Triton溶液（破膜剂、通透

一篇搞定 IP、co-IP 实验

或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴

【求助】co-IP

了，要分开难度还是很大，这时候就要很慎重，实验过程要十分肯定检测有这么一条目的条带才行。最好还是能找到不同来源的抗体啦~~ hiqihong 不同种源的抗体WB验证有时在IgG位置也出现条带 最好的办法是用洗脱buffer洗脱 如果是用tag做的IP 则用tag肽洗脱，IgG是能洗掉的 devil19840 紫叶竹韵 wrote: 做IP，之后Western 分析，看到有两条带

免疫共深沉（Co-IP）

一、原理： 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G（预先结合固化在琼脂糖小珠上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比，免疫