hPSC诱导分化肾类器官试剂盒

hPSC 诱导分化肾类器官试剂盒产品描述

Cat NO : IMV-K001

本产品为 hPSC 诱导分化肾类器官试剂盒，人多能干细胞 hPSC 通过该试剂盒诱导分化可得到肾类 器官，该类器官具类似肾的细胞组成，有肾小球、肾小管上皮细胞等。

本试剂盒需要操作人员具有 hPSC 培养经验，对类器官具有一定了解。

实验仪器、材料

仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱

材料：6 孔细胞培养板、超低吸附 6 孔板、离心管(规格为 15 mL 和 50 mL)、移液器(规 格为 10 μL 、100 μL 、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL 、200 μL 和 1000 μL)、 移液管(规格为 10mL 、50mL)

hPSC诱导分化肾类器官试剂盒内容

研究阶段	产品货号	产品名称	产品规格	储存
EB 形成阶段	IMV-K01	EB 形成培养基	30mL	-20℃ , 12 个月
	IMV-K01-S	EB 形成补充剂	60uL	20℃ , 6 个月
后原始条纹诱导 阶段	IMV-K02	基础培养基 1	20mL	-20℃ , 12 个月
	IMV-K02-A	补充剂 A	160uL	-20℃ , 6 个月
中间中胚层诱导 阶段	IMV-K03	基础培养基2	20mL	-20℃ , 12 个月
	IMV-K03-B	补充剂 B	400uL	-20℃ , 6 个月
肾发生阶段	IMV-K04	基础培养基3	40mL	-20℃ , 12 个月
	IMV-K04-C	补充剂 C	50uL	-20℃ , 6 个月
	IMV-K04-D	补充剂 D	600uL	-20℃ , 6 个月
肾类器官成熟阶 段	IMV-K05	成熟培养基	60mL	-20℃ , 12 个月

hPSC诱导分化肾类器官试剂盒使用流程

①EB 形成(2 天)

1.hPSC 于基质胶包被的六孔板的一个孔生长至 70-80%汇合度。

2.吸去培养基。

3.孔中加入 1mL PBS(无钙镁离子)洗，吸去。

4.孔中加入 1mL accutase ，37℃消化 3min。

5.取 11mL EB 形成培养基与 22μL EB 形成补充剂混匀获得 EB 形成完全培养基，于超低吸附6 孔板的3 个孔每孔加入 2mL EB 形成完全培养基。

6. 当看到克隆发白发亮，轻轻拍打板侧(每侧拍两下)，把细胞拍下来，再在生物安全柜中， 加入 1mL EB 形成完全培养基终止消化，把这 2mL 体系吸入装有 3mL EB 形成完全培养基的 15mL 离心管离心 160g 5min，吸弃上清至剩余几十微升，轻弹孔底3-4 下，让细胞沉淀溶于上 清，往孔板里加 1mL EB 形成完全培养基，轻弹3-4 下，混匀即可，把这一毫升细胞悬液平均 悬空加入提前准备的6 孔板3 个孔中，37℃、5%CO2 过夜。

7.第二天(D-1)镜下观察可以看到形成大量、均一的 EB ，半数换液，补充 50%EB 形成培养 基(不含补充剂)，置于水平摇床培养。(注意：所用培养基均应提前在工作台放置 30min 以恢复室温，后面操作同理。)

②后原始条纹诱导(4 天)

8.D0 ，解冻补充剂 A ，将基础培养基 1 与补充剂 A 混匀，作为后原始条纹诱导培养基。

9.吸出孔中EB 形成培养基，注意不要将 EB 吸出。

10.每孔加入2mL 后原始条纹诱导培养基，放入37℃ , 5%CO2 的培养箱继续培养。

11.D2 每孔更换 2mL 后原始条纹诱导培养基，操作如 9 、10。

③中间中胚层诱导(3 天)

12.D4 ，解冻补充剂 B ，将基础培养基 2 与补充剂 B 混匀，作为中间中胚层诱导培养基。每孔 更换2mL 中间中胚层诱导培养基，操作如9 、10。

13.D6 每孔更换2mL 中间中胚层诱导培养基，操作如 9 、10。

④肾发生(5 天)

14.D7 ，解冻补充剂 C、D ，将 10mL 基础培养基3 与补充剂 C 混匀，作为肾发生培养基 1。每 孔更换2mL 肾发生培养基 1 ，操作如 9 、10 ，放入 37℃ , 5%CO2 的培养箱培养 1 小时。

15.1 小时后，将 30mL 基础培养基3 与补充剂 D 混匀，作为肾发生培养基2 。每孔更换2mL 肾发生培养基2 ，操作如 9 、10。

16.D9 、D 11，每孔更换 2mL 肾发生培养基 2 ，操作如 9 、10。

⑤肾类器官成熟(11天)

17.D 12 开始，每 2 天更换成熟培养基，每孔 2mL ，操作如 9 、10 ，至 D23。

流程图及参考图片