大鼠脂肪干细胞（白色脂肪）分离试剂盒

产品描述

脂肪干细胞(ADSCs)是一种具有多向分化潜能的干细胞，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，有效改善亚健康、早衰等疾病。根据不同来源及分化阶段，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞具有分化为多种不同组织的能力。成体干细胞因其来源广泛、增殖能力强等特点，现已成为组织工程学研究的种子细胞。其中，脂肪干细胞作为组织工程修复的种子细胞，因其具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，正受到越来越多的关注。脂肪干细胞形态类似成纤维细胞，具有较强的增殖能力。在一定的诱导条件下，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、上皮细胞等，具有多向分化潜能。

适用范围

该试剂盒适用于Wistar、SD等不同品系的0-4周大鼠原代脂肪干细胞提取试剂盒。

规格

本试剂盒规格为5次(以5mL大鼠脂肪干细胞组织专用消化液为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
大鼠脂肪干细胞组织专用消化液	25 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠脂肪组织处理缓冲液	500 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠脂肪干细胞消化专用酶	100 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠脂肪干细胞专用完全培养基	500 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月

 

分离步骤

实验前准备：分装好的脂肪干细胞组织专用消化液、脂肪组织处理缓冲液、脂肪干细胞专用完全培养基;实验需自备含10%FBS的完全培养基、无菌手术器械、培养器皿、离心管若干。

一、脂肪干细胞提取：下面以SD大鼠为例

1. 取1周龄大鼠2只，麻醉处死，75%乙醇浸泡消毒3-5min(3天龄到4周龄均可，推荐周龄小)。

2. 无菌条件下剪开腹部皮肤双手捏住皮肤撕开，可见暴露的腹股沟处白色脂肪垫。

3. 无菌钝性剥离脂肪组织，取脂肪组织处理缓冲液清洗脂肪组织2-3遍，仔细去除筋膜组织及小血管。

4. 随后将脂肪垫取出放至培养皿内，加入1mL脂肪干细胞组织专用消化液(避免剪碎时组织干燥)，快速用弹簧剪剪碎脂肪组织(剪至米粒大小)，转移至15 mL离心管中。

5. 加入3mL的脂肪干细胞组织专用消化液，37℃水浴消化约20-30 min，直至细胞混合物成乳状浓稠液体。期间可吹打脂肪组织，辅助消化。

6. 250g，4℃，离心5min。注意离心机预冷至4℃。

7. 小心吸去上层油脂丢掉，注意不要破坏位于下方的沉淀。随后加入8mL完全培养基，重悬沉淀，过40μM细胞筛到新的离心管中，再次离心5min。重复洗涤一次，吸去上清。

8. 加入1mL完全培养基重悬沉淀，计数，以2.5*105/ml细胞一个6孔密度种板，置于37℃，5% CO2培养箱中培养(6孔一般2ml，6cm板4ml)。

9. 待细胞贴壁生长48h后首次观察、换液。换液时弃去培养基，从而去除未贴壁的细胞。

10. 以后每两天更换一次培养基，细胞汇合达80%-90%时，使用大鼠脂肪干细胞消化专用酶进行消化，按1:2或1:3比例首次传代。注意细胞密度，太密会导致细胞提前分化，整片脱落。

二、脂肪干细胞传代：

1.吸弃原培养液上清。

2.加入2-3 mL PBS润洗细胞，吸弃PBS.

3.加入1-2mL 大鼠脂肪干细胞消化专用酶至培养瓶中，并轻轻晃动培养瓶至消化液浸润所有细胞，放入37℃培养箱消化细胞2-3min。

4.倒置显微镜下观察，待细胞明显变圆有间隙后(全程请不要拍打培养瓶)，再加入3-5ml含10% 血清的培养基终止消化(稀释法终止消化，则培养基用量不应低于5ml)。

5.用巴氏管轻轻吹打混匀、分散细胞，250 xg，离心3-5min。

6.去掉上清，首次传代表按1∶2-1∶3比例传代培养。

注意事项

1. 全程分离操作过程建议在冰上进行，分离脂肪干细胞时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

2. 脂肪组织在剪碎的过程中不能研磨，以免破坏细胞。

3. 消化时间根据具体情况在20-30分钟范围内进行相应增减，未见明显组织则可停⽌消化。

4. 原代分离部分建议全程使用4℃离心机。

5. 大鼠脂肪干细胞组织专用消化液、大鼠脂肪干细胞消化专用酶、大鼠脂肪干细胞专用完全培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。