Thermo Fisher RevertAid第一链cDNA

反转录过程中需要考虑哪些因素？

为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。 为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容 RNA 模板制备 基因组 DNA 的去除 反转录酶选择 引物选择 主要反应组分 反应温度和反应时间 第一链和第二链 cDNA 合成 注

【求助】4 kb片段连接pcDNA3.1+的问题

： 1. 感受态种类与效率，尤其转化效率，一定要很高。效率越高转化成攻率越高。有的时候片段与载体已经连接成功了，只不过在转化时，自身空间结构较大，没有转进去。 2. 酶切反应：如果可以，请用thermo fisher的内切酶，无论单酶切还是双酶切，6 h足够了。takara的酶批次间稳定性经常有问题，而且长时间酶切，片段很容易切碎。 3. 4000+的片段先加A连接到T载体上，利用片段两端的酶切位点双切，回收后再连接载体。 4. 如果第3步还是不行，请尝试一下这个偏方

质粒与引物设计篇

效率，比如电转化比化学转化的效率更高。   3. 如何设计目的片段引物？ PCR 引物设计，是决定实验是否成功的重要一环，现有的 PCR 设计工具，比如‌Primer-BLAST (NCBI)、Primer Designer Tool (Thermo Fisher)、 Primer3 等都可以针对目标序列设计出相应的引物，可以根据目标序列特征、实验室资源来选择合适的引物设计工具。如果后续通过无缝克隆的方法构建载体，在设计 PCR 引物时，还需要将同源臂序列添加到上下游引物的两端。具体添加方法可参考所用的同源