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- 2025年07月11日
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5×10^6
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这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系，可以构建表达细胞系，也能构建敲降细胞系，经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系，一般情况下能够稳定表达最多长一周左右，而稳转细胞系，只要构建成功就能稳定表达，没有时间限制，但是也不是肯定的，一般实验构建的细胞系超过 10 代以后，这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来，咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒，虽然已经经过处理，但是一听这名字也觉得渗人，无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础，所以一定
，多是凝聚的蛋白，还有DNA等的沉淀产物，有人又把它叫“黑胶虫”。人们看到可以动，认为是生物，其实只是布朗运动。这和血清、细胞、转染试剂等都有关系。如果不影响实验，可以通过换液来除去。 10、问：如何确定构建的载体表达了shRNA呢？我的载体U6启动子下游有个CMV+GFP，GFP如果有荧光的话，能否直接说明表达了shRNA呢？ 答：确定shRNA表达的最好的方法是通过western Blot、qRT-PCR等，能直观观察到蛋白表达量的变化。如果采用基因表达和shRNA表达组合的方法
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