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- 广州
- 2025年10月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
艾迪基因
- 服务名称：
CRISPR文库筛选定制服务
- 规格：
套
| 应用领域 | 1、基因编辑 2、CRISPR检测6/管) |
|---|---|
| 周期 | 快至1周 |
| 价格 | 3800元起 ；具体可来电咨询18102225074 |
| Spcas9 | Lbcas12a | Aapcas12b | Lbucas13a | Lwacas13a | |
|---|---|---|---|---|---|
| PAM/PFS | 5’-NGG-3’ | 5’-TTTV-3’ | 5’-TTN-3’ | None | None |
| None | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Cis-cleavage | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Trans-cleavage | None | ssDNA | ssDNA | ssRNA | ssRNA |
- SpCas9是一种依赖于sgRNA引导的 DNA内切核酸酶。在靶标DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情况下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引导下特异性结合并切割靶标dsDNA，使DNA双链断裂并生成平末端。其切割位点位于目标序列target sequence内，距离PAM 3个碱基的位置。SpCas9不仅可用于基因编辑，还可应用于体外靶标 DNA 的切割、目的片段的克隆等实验。
- LbCas12a是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情况下，LbCas12a能在crRNA介导下特异性识别并切割双链DNA，而LbCas12a 特异性切割靶标单链DNA不依赖PAM序列。LbCas12a-crRNA复合物与互补dsDNA或ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活，通过设计两端标记荧光基团或其它小分子标记的Reporter ssDNA，可实现Cas12a对DNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪和试纸条观察结果。
- AapCas12b核酸酶是一种依赖 sgRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情况下，由sgRNA介导特异性识别并切割双链DNA，而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补的dsDNA或者ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的最佳反应温度为60℃，因此适合与环介导等温扩增（LAMP）联用。
- LbuCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现对RNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪或试纸条观察结果。
- LwaCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，与LbuCas13a一样，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可实现对体系中的ssRNA的非特异切割。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。
通过活性测试，对比艾迪基因提供的基因编辑用酶与竞品的性能。
反应体系中添加待检Target模板、Cas酶、crRNA和荧光探针，当crRNA与Cas酶组装成功能复合物并识别Target模板后，会激活Cas酶的反式切割活性并切割荧光探针释放出荧光信号，通过荧光值来反映酶的性能。左图和右图是分别针对Lbucas12a和Lwacas3a两种酶进行测试，结果显示，艾迪基因提供的酶的荧光强度更强，切割活性与灵敏性明显更优。
Cas12与guide RNA、target DNA结合后会被激发针对ssDNA的反式剪切活性；Cas13与guide RNA、target RNA结合后会被激发针对ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暂未被报道反式剪切活性。
①RPA恒温扩增试剂盒于-20℃保存，可长期存放。
②靶标质粒可长期存放-20℃ ③ Cas蛋白反复冻融容易影响活性，建议分装多管，存放-80℃，根据实验需要取出使用。另外，短期内使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建议短时间内用不到的于-80℃保存。
④探针是DNA双链，相对来说没有那么容易降解，可放-20℃保存。
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