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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办? 在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30 ℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告
;。 ⑥ 因pGBKT7含Kan+抗性基因,在Kan+抗性平板上筛选阳性克隆。 ⑦ 测序验证CaM与gal4 DNA 结合功能区融合,插入序列读框正确、无碱基突变。 2.pGBKT7 – CaM转化酵母菌Y2HGold 将pGBKT7- CaM采用PEG/LiAc法转化酵母菌Y2HGold,涂布于SD – Trp固体培养基上,30° C 3-5天,菌落长出。 进行CaM自激活鉴定及毒性测定。 3.龙须菜高温胁迫表达cDNA文库
。因此,在M9/SD/-Trp培养基上,只有含有AD-文库质粒的转化菌才能生长,将其扩增、并抽提质粒DNA,酶切鉴定。 9-3. 用pLexA-靶DNA与pB42AD-库DNA一一对应、共转化只含有报告基因的酵母菌EGY48中,先到SD/-His/-Trp/-Ura板扩增,并与后面的诱导板形成对照,说明报告基因的表达与诱导AD融合蛋白的表达有关,再确证LacZ、Leu报告基因的表达。 9-4. 扩增与靶DNA相互作用的文库DNA,进行序列分析及进一步的结构、功能研究。
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