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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验4-2. 如果pLexA-X虽然不会自动激活报告基因,但对酵母宿主细胞有毒性,则需要与纯化的文库DNA同时转化酵母。 5. 如果pLexA-X既不会自动激活报告基因,也不具有毒性,则可以与纯化的文库DNA同时、或顺序转化酵母细胞,并检测质粒转化效率。 转 化 质粒 SD固体培养基 LacZ表型 对照1 pLexA-Pos Gal/Raf/-His/-Ura 蓝 对照2 pLexA-53 Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu 蓝 +pB42
法将cDNA 文库质粒转化到酵母菌Y187中,SD – Leu平板上30 ℃培养3~5 天,菌落长出。 5.酵母交配转化及阳性克隆的筛选 将酵母菌Y187/ pGADT7-cDNA与酵母菌Y2HGold/pGBKT7- CaM进行酵母交配转化(Yeast Mating),SD–Trp/-Leu/Aba/X-α-gal平板上30 ℃培养3~5 天,筛选蓝色菌落,再将阳性克隆在SD–Trp/-Leu/-His/-Ade/Aba/X-α-gal平板上进行验证
1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办? 在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30 ℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告
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