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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验in 100 ml ddH2O. B. 10 ml of 1M MgCl2 +1 M MgSO4 with ddH2O, autoclave. (Prepare 1M MgCl2 first, then add MgSO4 into it) C. 50 ml of 1 M glucose with ddH2O, filter, aliquot in 1.5 ml, store at -20°C D. For 100 ml SOB medium: (Amount/volume) Bacto
相关专题 准备工作: ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA,在15 ml Falcon tube 和cuvette(电转化用的石英样品槽,两面磨光,两面磨砂)标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌(45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s)置于
系列):高拷贝会导致大片段质粒复制压力大,易丢失或断裂,优先用低拷贝载体(如 pACYC184,拷贝数 10-15)或大片段专用载体(如 BAC 载体 pBeloBAC11,可容纳 100kb 以上片段,在大肠杆菌中稳定存在); ④选择合适的连接方法,比如 Gibson 组装(无缝克隆)的方法更适合 10-20kb 大片段的连接,相比传统的 T4 连接的方法,成功率更高,操作更简便; ⑤选择重组缺陷型感受态,提高大质粒的转化效率,如 Stbl3、DH10B 等,此外转化方式也会影响转化
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