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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
美国GENMED品牌主营业务包括有:细胞培养(Cell Culture)试剂技术、分子技术、蛋白化学技术、免疫抗体技术、医学技术、生物化学技术、模式生物技术、微生物技术、植物技术、载体技术、毒理技术、营养技术、平台技术、生物分类学(taxonomy)分析技术等20余项,详细的项目可以咨询在线客服!
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文献和实验碘化物缓冲液: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的?我怎么没有提出DNA来,不知道是为什么?用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增,在第一步离心后,将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。2. 加200 µl PEG/NaCl,颠倒混匀,室温放置10 min。3. 离心10 min,弃上清液。4. 短暂离心,小心吸去残余上清。5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中
孔,在密封的湿盒内4℃孵育过夜。每一个克隆包被一列。 (11)倾去靶溶液,并将板子反扣在吸水纸上尽量吸干。在每一个孔中加满封闭缓冲液。另外,每个克隆都需要封闭一列未包被的加样孔,以检测其与BSA包被板子的结合。封闭另一个酶标板用来稀释噬菌体,这样可以保证稀释过程中噬菌体不被靶蛋白吸收。4℃封闭1~2h。 (12)倾去封闭液,用1´TBS/Tween洗涤板子6次,每次都将酶标板反扣在吸水纸上尽量吸干。Tween的浓度应该与筛选洗涤步骤的浓度相同。 (13)用TBS/Tween
梯度(两个孔)取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值(三个孔)取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度,按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量,算法为:上样量= 50/蛋白浓度。注:所有得到的 OD 值必须减去背景(标曲中空白孔的 OD 值)后再计算。 样品处理: 蛋白样品:5×SDS 上样缓冲液按照 4:1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用(可保存半年),样品长期保存须置于 -70
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