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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
[1]把细胞内外某离子的电化学电位等于零时的膜电位,称为该离子的平衡电位。可通过能斯特方程计算,例如钾离子的平衡电位 Ek 可赋予下式: 式中, [K ]0 和 [K ]1 分别是钾离子在膜外、内的浓度(确切的说是移动度), F是法拉第常数, T是绝对温度, R是气体常数。哺乳类动物骨胳肌的静息电位是 -90mV,离子的平衡电位钠是 66mV,钾是 -97mV,氯是 -90mV。因为在静息状态下,细胞膜主要对 K 、 Cl
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