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48T
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文献和实验饥饿的 HeLa 和 NIH 3T3 癌细胞系获得的裂解物中的磷酸化蛋白特异性。图示:从复杂生物样品中富集高纯度磷蛋白。用 theThermo Scientific Pierce 磷酸化蛋白富集试剂盒进行 Weste blot 分析,根据试剂盒说明书制备细胞裂解液,富集磷酸化蛋白。利用识别生长因子信号传导相关关键调控蛋白的磷酸化特异性抗体实现蛋白检测。细胞色素 C (pI 9.6) 和 p15Ink4b (pI 5.5) 作为非磷酸化蛋白非特异性结合的阴性对照。FT = 流穿馏分,W = 合并洗脱馏分,E
过滤法。①Farr法的原理为用同位素标记DNA,被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合,经50%硫酸铵饱和液沉淀,然后比较沉淀物和上清液中的放射活性,从而得出DNA结合活性,一般结合率大于20%为阳性。②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器(孔径为0.45μm)进行过滤,游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。 3.ELISA临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体,其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。目前已有试剂盒供应。
细胞程序性死亡是正常生理现象,多发生于胚胎发育和维持组织自身平衡。Kerr et al.最早发现有两种细胞死亡:坏死(Necrosis)和凋亡(Apoptosis)。Apoptosis,希腊文意思是树叶从树上“凋落”,这里是指凋亡,是细胞主动参与自身死亡的过程。凋亡程序有一些特殊形态学特征,包括质膜的改变,如细胞膜不对称性和细胞附着消失,胞浆和细胞核固缩,核内DNA裂解。到了晚期,凋亡细胞断裂成“凋亡小体”,并很快被巨噬细胞清除,而不会引起周围细胞的炎症损伤。坏死,通常是由细胞损伤或细胞
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