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- BHcell（博辉生物）
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- 2025年07月14日
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2ug
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文献和实验maoliping70：pEGFP-N1为载体表达的核蛋白要确证表达于核内的方法为用PI染色，PI只与核酸结合，在488nm激发下发红光，而GFP发绿光，红光与绿光重叠发黄光。还有以下疑问：1.作为对照的pEGFP-N1空载体转染细胞后表达的GFP蛋白为27KD，能自由通过核孔复合体，也就是说GFP在核内也有表达，那会与PI重叠发黄光影响测定吗？2.有提出GFP在细胞固定时，会从细胞漏出，那细胞本身表达的浆蛋白若分子量小，也会漏出吗？还是因为有定位信号而不漏出？3.细胞固定用的70%乙醇是直接
影响的。 ono1180 我想问一下，除了正规公司，什么地方能求购到比较便宜，又能够保真的质粒 lisail 我有PLEGFP-N1的病毒载体，需要的话联系我Q2427657955 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端？ lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家！ hiqihong
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