特超敏化学发光检测试剂盒（Super ECL Star）

产品概述：
产品名称：特超敏化学发光检测试剂盒（Super ECL Star）
产品规格：10 mL/100 mL
产品应用方向：蛋白检测、CEL
产品保存条件：4℃密封避光保存，短期可放置于室温。有效期见外包装。
产品运输条件：冰袋
保质期（月）：12

产品介绍：
Super ECL Star 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度的增强型化学发光（ECL）底物，可通过辣根过氧化物酶 （HRP）实现极低表达或高价值蛋白的免疫印迹检测。Super ECL Star 特超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统，Super ECL Star 超敏发光液是极度灵敏的荧光 ECL 检测试剂。

使用方法：
1. 执行常规 SDS-PAGE 电泳、转膜和 Western Blot 步骤， 0.01-0.2 μg/mL 一抗室温孵育 1 h 或 4℃过夜，洗膜后，2-10 ng/mL 二抗孵育 30-60 min。
2. Western Blot 最后一次洗膜时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液 A 和 B，混匀。注：建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 成像仪检测：用镊子取出 PVDF 膜置于成像仪检测板上，含蛋白面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液（0.125 mL 发光工作液/cm2 膜）滴加在 PVDF 膜上，使发光液完全覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，参考仪器说明书进行检测。
4. 压片检测：用镊子取出 PVDF 膜置于保鲜膜上，含蛋白面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液（0.125 mL 发光工作液/cm2膜）滴加在 PVDF 膜上，使发光液完全覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，弃发光工作液，用保鲜膜包好，将膜固定于片夹内，含蛋白面向上。暗室内压片 1 min，立即显影，根据结果再调整压片时间。或分别压片 0.5、 1、3、5 min，然后一起显影观察结果。

注意事项：
1. 步骤 1~4 可在日光灯下操作，但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系，曝光不足则条带模糊。
3. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。
4. 由于特超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体稀释浓度为一抗 1:5000~1:100,000，二抗 1:100,000~ 1: 500,000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带。
5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。

产品特点：
1. 具有极高灵敏度和高信噪比，使用适当的一抗和二抗时，可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测极低表达或高价值蛋白的条带；
2. 明亮信号。通过胶片或成像系统曝光，易于捕获图像；
3. 价格经济：配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测。
• 10 ng-0.2 μg/mL 一 抗 （ 或 1 mg/mL 的 稀 释 1:5,000-1: 100,000）
• 2 ng-10 ng/mL 二 抗（ 或 1 mg/mL 的 稀释 1:100,000-1: 500,000）