灵敏化学发光检测试剂盒（Super ECL Prime）

产品概述：
产品名称：灵敏化学发光检测试剂盒（Super ECL Prime）
产品规格：10 mL/100 mL/500 mL
产品应用方向：蛋白检测、ECL
产品保存条件：4℃密封避光保存，短期可放置于室温。有效期见外包装。
产品运输条件：冰袋
保质期（月）：12

产品介绍：
Super ECL Prime 免疫印迹底物是用于增强型化学发光 （ECL）的入门级过氧化物酶底物，性能可靠，但成本更低，性价比极高。 Super ECL Prime 免疫印迹底物适用于辣根过氧化物酶 （HRP）的检测，该底物采用了与其它品牌相同的鲁米诺和过氧化物酶底物配方，无需对检测条件或孵育方案进行优化，从而大大节约成本。

使用方法：
1. 执行常规 SDS-PAGE 电泳、转膜和 Western Blot 步骤后， 0.25-1 μg/mL 一抗室温孵育 1 h 或 4℃过夜，洗膜后，0.1-0.2 μg/mL 二抗孵育 30-60 min。
2. Western Blot 最后一次洗膜时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液 A 和 B，混匀。注：建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度会有降低。
3. 成像仪检测：用镊子取出 PVDF 膜置于成像仪检测板上，含蛋白面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液（0.125 mL 发光工作液/cm2 膜）滴加在 PVDF 膜上，使发光液完全覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，参考仪器说明书进行检测。
4. 压片检测：用镊子取出 PVDF 膜置于保鲜膜上，含蛋白面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液（0.125 mL 发光工作液/cm2膜）滴加在 PVDF 膜上，使发光液完全覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，弃发光工作液，用保鲜膜包好，将膜固定于片夹内，含蛋白面向上。暗室内压片 1 min，立即显影，根据结果再调整压片时间。或分别压片 0.5、 1、3、5 min，然后一起显影观察结果。

注意事项：
1. 发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能有降低，操作时注意避光。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光会加深背景；蛋白过量，会使条带强弱变化失去线性关系；曝光不足，则条带模糊或较浅。
3. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 曝光。
4. 由于发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体稀释浓度为一抗 1:1000~1:4000，二抗 1:5000~1:10000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带。
5. 某些保鲜膜可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN3 会抑制 HRP 活性，回收二抗应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。