PicoGreenTM 核酸荧光染料

产品概述：
产品名称：PicoGreenTM 核酸荧光染料
产品规格：1mL
产品应用方向：定量双链DNA、NGS建库
产品保存条件：4℃避光保存，有效期见外包装
产品运输条件：冰袋
保质期（月）：36

产品介绍：
PicoGreen是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA文库的构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的检测方法是在260 nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量检测方法简单、方便，成为生物制品残留DNA检测的标准。 PicoGreen只有与dsDNA结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与DNA浓度成正比。PicoGreen可以检测出25 pg/mL-1000 ng/mL范围内的dsDNA，且线性关系较好(R2>0.99)。 对于终体积为200 μL的检测体系，0.1 mL规格可检测200个样本，1 mL规格可检测2000个样本。

使用方法：
试剂制备 PicoGreen dsDNA定量试剂是以1 mL的浓缩液形式保存在无水的DMSO（二甲基亚砜）中。实验时，配制2×PicoGreen工作液：将浓缩液用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200的比例稀释。对于终体积为200 μL的检测体系，如需准备足够20个样品测定的工作液，可在1.99 mL 1×TE中加入10 μL PicoGreen；对于终体积为2 mL的检测体系，如需准备足够20个样品测定的工作液，则需要在19.9 mL 1×TE中加入100 μL PicoGreen浓缩液。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen见光易降解，因此要注意避光保存。溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。实验方法 1. 标准品工作液的配制： Sigma小牛胸腺DNA干粉1 mg（Tris，NaCl等浓度已成标准体系），加入1 mL双蒸水，配制成1 mg/mL的标准液。 2. 染料工作液的配置：
5 μL PicoGreen加入0.995 mL TE（注意：用1×TE将PicoGreen稀释200倍，现用现配，注意避光）。 3. 标准液稀释：（1）母液稀释：取10 μL（1 mg/mL）标准液加入到990 μL TE溶液中，稀释成10 μg/mL，取10 μL（10 μg/mL）标准液加入到 990 μL TE 溶液中，稀释成100 ng/mL。（2）倍比稀释：取800 μL（100 ng/mL）的标准液加入到200 μL TE溶液中，浓度为80 ng/mL，取500 μL（80 ng/mL）的标准液加入到500 μL TE溶液中，稀释到40 ng/mL；依次倍比稀释，配成20 ng/mL、10 ng/mL、5.0 ng/mL、2.5 ng/mL。 4. 标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100 μL混匀，避光室温放置5 min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在样品中引入气泡，轻弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为空白对照，测定样品和空白对照的荧光值；或者直接用96孔板进行荧光检测，激发波长480 nm，发射波长520 nm，用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。 5. 测量待测样品的荧光值。根据制作的DNA浓度的标准曲线，计算待测样品浓度。

注意事项：
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. PicoGreen工作液最好现配现用，以保证最佳结果。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题解答：
我试图对一些带有荧光基团标记的DNA进行定量。这可行吗？
PicoGreen 染料和其它基于荧光定量的试剂不建议用于对染料偶联的核酸进行定量。核酸上携带的染料基团会干扰定量试剂的结合或荧光产生。
该染料能否耐受污染物？
基本不受ssDNA和RNA的影响，并且可以耐受一定浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白等干扰。
该染料能检测哪些DNA？
可检测多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物