- ¥1800
- KAPA
- kk2620/kk2621
- USA
- 2025年08月25日
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- 英文名：
KAPA Library Amplification Kit with Primers (50 x 50 µl reactions)
- 规格：
(50 x 50 µl reactions)
在PCR扩增过程中，DNA扩增酶对文库中的不同DNA片段的扩增效率不完全一样。而非均匀的扩增所有的基因片段。这种扩增偏好性会加剧测序覆盖度的不均衡性。KAPA HIFI文库扩增试剂是为了应对由PCR扩增产生的偏好性问题。试剂盒中含有的新型KAPA HIFI DNA扩增酶，是二代基因工程酶，具有高保真性，高眼神能力，对于复杂DNA模板展示出均衡的扩增效率。
,产品应用
高效，高保真，低偏好，扩增测序前的文库，主要包括：
1，全基因组鸟枪法测序。
2，靶标测序（补货前/后扩增）
3，扩增子测序
4，CHIP测序
5，RNA测序
技术优势：
1，提高基因组中GC或高AT区的扩增效率
2，降低扩增偏好性从而提高测序覆盖度。
3，具有行业领先的工业级保真性。
3、优异表现
(1)高GC含量对于使用普通具有校正功能(proof-reading) (B-家族)扩增酶扩增的文库在测序读深中的影响
(2)根据文库扩增所用的扩增酶的不同，低GC含量的文库会产生不同的扩增偏好性
上图：采用相同的物理打断的 P.falciparum(恶性疟原虫，AT含量65%)gDNA制备的文库用图中所示的PCR试剂(KAPA HiFi，Phusion®)分别进行扩增，然后与没有进行扩增的同等文库进行比较。不同条件下测序read的观察到的不同GC含量的频率如图中曲线所示(黑色=没有扩增;绿色=KAPA HiFi热启动Master Mix;蓝色=Phusion® HF Master Mix)。Reads的期望频率分布为图中灰色阴影区域。未经扩增的文库曲线基本与期望频率分布区域外缘重合。使用KAPAHiFi作为扩增的文库表现出最小的偏差，而使用Phusion®进行扩增的文库中高GC含量的片段，和低GC含量的片段相比，表现出巨大扩增偏差。各文库平均覆盖深度为16.0X(作为对照的未扩增样本);16.5X(KAPA HiFi);18.8X(Phusion®)。以上数据由The Wellcome Trust Sanger Institute,Dr.Michael A.Quail提供。
(3)文库扩增会极大影响测序覆盖度的一致性
以下在Artemis的截屏图像描绘了分别使用KAPA HiFi热启动Master Mix、Phusion® HF Master Mix进行文库扩增后，与未进行文库扩增的对照相比，出现的覆盖度偏差。经过上诉不同的扩增途径，无论是高GC含量还是低GC含量的片段，覆盖度偏差的程度也有不同。
上图：P.falciparum(恶性疟原虫)基因组中一7kb片段的覆盖深度和GC含量
在这段基因组序列中，有3处AT含量>80%，从而导致覆盖度偏差(灰色标注区域)。在这三处高AT区域中，使用PHusion®(蓝色)进行文库扩增后，覆盖深度急剧下降;而使用KAPA HiFi(绿色)进行文库扩增后，三处区域覆盖深度与基因组其他区域统一、一致，而且与没有进行扩增的对照组的覆盖深度结果基本重合。
上图：B.pertussis(百日咳鲍特菌)基因组中一7kb片段的覆盖深度和GC含量
在这段基因组片段中，有4处GC含量>75%，从而导致覆盖度偏差(灰色标注区域)。在这4处高GC含量区域中，使用PHusion®(蓝色)进行文库扩增后，覆盖深度和未进行扩增的对照相比，急剧下降;而使用KAPA HiFi(绿色)进行文库扩增后，4处区域覆盖深度比较统一、一致，与没有进行扩增的对照组(黑色)的覆盖深度结果相似。
(4)高保真文库扩增的超高准确性
上图：DNA扩增酶(包括混合酶)的错误率KAPA HiFi扩增酶对的错误率/错配率是每覆盖3.54×106 碱基仅出现一个错误(2.82×10-7)，错误率比Taq扩增酶低100倍，比基于Taq的混合酶低40倍，比Phusion®低2倍。
4、产品信息
| 二代测序文库制备 | KK8230 | KAPA LTP文库构建（含文库扩增）试剂盒－Illumina | 10个文库 | 2500 |
| KK8231 | KAPA LTP文库构建（不含文库扩增）试剂盒－Illumina | 10个文库 | 2400 | |
| KK8232 | KAPA LTP文库构建（含文库扩增）试剂盒－Illumina | 50个文库 | 11000 | |
| KK8233 | KAPA LTP文库构建（不含文库扩增）试剂盒－Illumina | 50个文库 | 10500 | |
| KK8234 | KAPA HTP文库构建（含文库扩增）试剂盒－Illumina | 96个文库 | 18000 | |
| KK8235 | KAPA HTP文库构建（不含文库扩增）试剂盒－Illumina | 96个文库 | 17000 | |
| KK8260 | KAPA TruSeq Adapter Kit, (Illumina, 20 μl each) | 144 rxn | 14000 | |
| KK2620 | KAPA Library Amplification Kit with Primers (50 x 50 µl reactions) | 50rxn | 1800 | |
| KK2621 | KAPA Library Amplification Kit with Primers (250 x 50 µl reactions) | 250rxn | 8000 | |
| KK2623 | KAPA Library Amplification Primer Kit (250 x 50 μl rxns) | 250rxn | 1500 | |
| KK8400 | KAPA Stranded RNA-Seq Library Preparation Kit (Illumina,24 reactions) | 24 rxn | 13000 | |
| KK8401 | KAPA Stranded RNA-Seq Library Preparation Kit (96 reactions) | 96 rxn | 40000 | |
| KK8420 | KAPA Stranded mRNA-Seq Library Preparation Kit (24 reactions) | 24 rxn | 15000 | |
| KK8421 | KAPA Stranded mRNA-Seq Library Preparation Kit (96 reactions) | 96 rxn | 47000 |
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文献和实验室，实现高通量的目的。再通过KAPA专利技术来筛选出具有特定功能(比如，快速，或者超强PCR)的DNA聚合酶。和体积庞大的机械手相比，该技术的筛选过程是在1ml小试管中完成。能够完成对文库中所有变异株的筛选（>108）。在这个基础上，经过几次循环，就可以得到具有特定功能的聚合酶。
含有这两种酶切位点序列。 已经开始进行ta克隆 如楼上战友所述，TA克隆的确是长片段亚克隆的好的手段。我最初开始学习构建质粒的时候也是先上TA，不过我们实验室一直使用一种KAPA HIFI readymix的酶，效果很好，保真性也非常非常高，就是做TA的时候比较麻烦，需要把PCR产物纯化回收后再加一次A tail，而就是这一步我感觉一直没有摸索到最优化稳定的条件，所以每次加A后连pCR2.1 转化的结果都不稳定，有时候长的多有时候长得少，之前曾经就这个问题发帖
列的质量评估工作，证明了提取环境样品DNA的过程中使用IRT技术的重要性。一篇总结性文章曾发表于ASM 2010年年会（可致电：0755-8348 9872索取）。使用含IRT技术的MO BIO PowerSoil® DNA Isolation Kit，与不含IRT技术的竞争品牌试剂盒，提取0.1g堆肥做对比试验。最终DNA用分光光度法和凝胶电泳分析作初步分析，然后用通用引物16S rRNA，KAPA2G Fast HotStartReadymix酶跑end-point PCR。下图（图3A）展示
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