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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温,避光,12个月
- 库存:
现货
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
2×100ml
注意事项:对组织的损伤小,色素沉着少。
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文献和实验制成50% 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子,4℃ 振荡 10 min,进行预清除。 4℃,10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子,转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法(考马斯亮蓝染色法)测定上清蛋白浓度。(应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定,这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用)。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度,用 PBS
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer ( 10 μM 1-5 μL 下游 Primer ( 10 μM ) 1-5 μL 模板 lamid DNA ~ 50 ng genomic DNA ~ 1000 ng cDNA ~ 500 ng 粗提液 ~ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例: 一、plasmid DNA 扩增 1.提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100,250,500
,然后将 NC 膜夹在两层滤纸间,保存于干燥处。五、探针标记进行 Southern 杂交的探针一般用放射性物质标记或用地高辛标记。放射性标记灵敏度高,效果好;地高辛标记没有半衰期,安全性好。这里介绍放射性标记。探针的标记方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法,有一些试剂盒可供选择,操作也很简单。以下为 Promega 公司随机引物试剂盒提供的标记步骤:1. 取 25~50 ng 模板 DNA 于 0.5 mL 离心管中,100 ℃ 变性 5 min,立即置冰浴。2. 在另一个 0.5 mL 离心管中
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