线粒体钙离子检测试剂盒(Rhod-2 AM)

碧云天研发生产的线粒体钙离子检测试剂盒(Rhod-2 AM) (Mitochondrial Calcium Assay Kit with Rhod-2 AM)，也称线粒体钙流检测试剂盒(Mitochondrial Calcium Influx Assay Kit with Rhod-2 AM)，是一种以Rhod-2 AM为荧光探针，快速灵敏地检测线粒体内钙离子(Ca2+)变化的试剂盒。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测。

钙(Calcium)通常是哺乳动物机体内最为丰富的矿物质，参与调控众多的细胞生命活动过程，也是最为重要的细胞内调控因子之一。线粒体钙离子调节多种线粒体功能，如线粒体内的氧化代谢、ATP合成等，并参与调控细胞的死亡。线粒体钙离子的适度增加导致柠檬酸循环中相关酶的激活，从而促进ATP合成；但线粒体钙离子超载时，可导致线粒体功能障碍和细胞死亡[1-3]。

Rhod-2 AM，也称RHOD 2-AM、RHOD-2 AM、线粒体钙离子荧光探针，CAS号为145037-81-6，分子量为1124.0，分子式为C52H59N4O19·Br。Rhod-2 AM是Rhod-2的乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜通透性，进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成Rhod-2，从而被滞留在细胞内。由于Rhod-2具有线粒体特异性探针Rhodamine (罗丹明)的主要结构，从而可以进入线粒体并和线粒体中的钙离子结合，结合钙离子后在552nm激发光下可以产生强烈的荧光，因此Rhod-2 AM常用于监测线粒体内的钙离子浓度变化[3-7]。

Rhod-2有些类似于Fluo-3和Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着钙离子浓度变化发生明显的偏移，但与Fluo-3和Fluo-4不同的是，Rhod-2可以特异性地检测线粒体内的钙离子变化，并且Rhod-2的波长更长，适用于具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行钙离子检测实验，也适用于可见光活化钙离子螯合剂和光感受器产生的钙离子检测。Rhod-2最大激发波长为552nm，最大发射波长为581nm。Rhod-2与线粒体钙离子结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。

图1.Rhod-2与线粒体钙离子结合后的激发光谱和发射光谱。

本试剂盒使用便捷，提供了多种配套试剂。本试剂盒提供了用于稀释Rhod-2 AM的检测缓冲液(Assay Buffer)，该检测缓冲液可以极大程度地保证细胞活力和接近正常的生长状态；提供了可增强Rhod-2 AM溶解性的促溶剂(Solubility Enhancer)可以改善染色效果；提供的染色增强剂(Staining Enhancer)在检测中可有效地维持细胞内荧光并减少背景荧光；同时，本试剂盒提供CaUp作为诱导细胞线粒体内钙离子浓度升高的阳性对照。本试剂盒检测细胞线粒体钙离子的效果参考图2。

图2.碧云天线粒体钙离子检测试剂盒(Rhod-2 AM) (S1062)检测NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)线粒体内钙离子的效果图。NRK-52E细胞不处理或使用阳性对照CaUp处理后，使用本试剂盒和Hoechst 33342以及Mito-Tracker Green进行染色。正常的NRK-52E细胞中线粒体内钙离子浓度较低，Rhod-2的红色荧光非常弱；使用CaUp处理30分钟后，线粒体内钙离子超载，Rhod-2与线粒体内钙离子结合，红色荧光显著增强。蓝色荧光为Hoechst 33342标记的所有细胞的细胞核，绿色荧光为Mito-Tracker Green标记的所有细胞的线粒体。本试剂盒中不提供Hoechst 33342和Mito-Tracker Green，如有需要，可向碧云天订购Hoechst 33342染色液(C1025-C1029)、Mito-Tracker Green (C1048)。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

对于96孔板中的样品，按照每孔使用100μl Rhod-2染色液计算，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行200次和1000次检测；如果用于流式细胞仪检测，按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行40次和200次检测；对于6孔板中的贴壁培养细胞样品，按照每孔使用1ml Rhod-2染色液计算，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行20次和100次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
S1062S-1	Rhod-2 AM (500X)	40μl
S1062S-2	Solubility Enhancer (500X)	40μl
S1062S-3	Assay Buffer	50ml
S1062S-4	Staining Enhancer (100X)	200μl
S1062S-5	CaUp (500X)	20μl
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
S1062M-1	Rhod-2 AM (500X)	200μl
S1062M-2	Solubility Enhancer (500X)	200μl
S1062M-3	Assay Buffer	250ml
S1062M-4	Staining Enhancer (100X)	1ml
S1062M-5	CaUp (500X)	100μl
—	说明书	1份

保存条件：

除Rhod-2 AM (500X)外，-20ºC保存，一年有效。Rhod-2 AM (500X) -80ºC保存。其中Rhod-2 AM (500X)和CaUp (500X)须避光保存。

注意事项：

第一次使用时请适当分装后保存，以避免反复冻融。

BSA和酚红(Phenol red)对本荧光探针的检测有干扰，须避免。

本试剂盒仅限于存活的细胞或组织的检测，不可用于固定或冻存的细胞或组织样品的检测，但染色后可以固定细胞或组织。

荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。

Rhod-2 AM (500X)和Solubility Enhancer (500X)使用时请确保已完全溶解。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。