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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Sphingomyelinase
技术指标
| 外观 | 白色无定形冻干粉末 |
| 纯度(SDS-PAGE) | ≥90.0% |
| 酶粉比活力 | ≥220.0 U/mg |
| 葡萄糖氧化酶 | ≤0.01% |
| ATP 酶 | ≤0.005% |
| 过氧化氢酶 | ≤0.001% |
酶学性质
| 来源 | 微生物,鞘磷脂酶 |
| 分类 | EC 3.1.4.12 |
| 分子量 | 36kDa (SDS-PAGE) |
| 等电点 | 8.6 |
| Km 值 | 2.4×10-5 M (Sphingomyelin) |
| 抑制剂 | EDTA |
| 最适 pH | 8.0 |
| 最适温度 | 45℃ |
| pH 稳定性 | 6.0-8.0 (37℃, 60min) |
| 热稳定性 | 40℃以下稳定 (pH 7.5, 30 min) |
| 稳定性 | -25~-15℃静置保存 12 个月保持90%以上活性 |
用途
用于小而低密度脂蛋白试剂的研发和大量配制。
酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成 1μmol H2O2 所需的酶量。
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文献和实验所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右,让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。我用的是小培养瓶,方法是:先把旧的培养液倒掉,用D-HANK'S大约3ml洗一次,加浓度为0.1%的胰酶进行消化,添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底,大约要1.5ml,最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5分钟,在显微镜下观察细胞收缩,变圆,加入3ml的10%的血清终止消化。小心仔细的吹打培养瓶底使细胞
都是贴壁细胞,在消化传代过程中,步骤如下:倒尽旧的培养液->用无血清的培养基清洗一两次->加入一定量的胰酶,置于37度培养箱中5--10分钟,使细胞悬浮->显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->加入一定量的含血清的新培养液,以终止胰酶作用->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->最后再补充加入一定量新的培养液。注意: 1、吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀,可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
体内还存在鞘磷脂酶,这种酶的激活可直接导致神经酰胺的大量积累,引起线粒体细胞色素c释放。溶酶体内还可能存在其他蛋白酶参与细胞凋亡,有关溶酶体凋亡信号的激活和参与凋亡的具体途径有待进一步深入研究。










